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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 如何选择蛋白表达宿主菌
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)

[求助] 如何选择蛋白表达宿主菌 已有2人参与

本人要做的课题是LSD1蛋白表达、纯化条件的优化，实验室现在所用的表达载体是pET28b，所用菌株是BL21(DE3)。我首先要优化的条件是蛋白表达宿主菌，看BL21(DE3)是否为最合适菌株，对于纷繁复杂的宿主菌，我看的是眼花缭乱，不知道如何选择。有些帖子说要根据表达蛋白去选择菌株，不知道主要看蛋白的什么性质，哪些特征去做选择。特求助于万能的虫友，谢谢！
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1楼 2015-10-15 18:02:09
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-19 00:45:49
你把手头有的E.coli宿主都试试，做实验不能闲下来，一边做一遍看文献，慢慢就有了思路。

非常感谢！我真的是思路有限，实验室所有人现在只用一种菌株，现在要去买新菌株，不知道如何下手了，如何挑了，现在准备订BL21(DE3)pLysS,Rosetta-gamiB(DE3)pLysS,Origami2(DE3)pLysS这几个菌株，不知道合不合适，试试吧！

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9楼2015-10-19 08:10:18
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victorLeo

木虫 (小有名气)

General Frontier
大多是BL21，但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽，当然这还是得依靠实际的表达情况来看，如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化，如果要是沉淀表达的话，就是包涵体了，纯化较难。如果BL21不行一般还有用rosseta菌株的。
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希望探讨，多谢指教，讨厌说教，更讨厌不懂装懂。
2楼2015-10-16 16:51:29
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by victorLeo at 2015-10-16 16:51:29
大多是BL21，但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽，当然这还是得依靠实际的表达情况来看，如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化，如果要是沉淀表达的话，就是包涵体了，纯化较难。如果BL21不行一 ...

谢谢您的答复，我还有两个问题。信号肽的预测是用软件还是别的什么工具？蛋白在菌体内，需要超声裂解，这个属于包涵体吗？

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3楼2015-10-17 08:02:54
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
高傲的范儿: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-24 16:44:59
本帖内容被屏蔽
4楼2015-10-19 00:06:49
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.
你把手头有的E.coli宿主都试试，做实验不能闲下来，一边做一遍看文献，慢慢就有了思路。

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5楼2015-10-19 00:45:16
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厚德求是

金虫 (著名写手)

Ph. D. Prof.

【答案】应助回帖

你把手头有的E.coli宿主都试试，做实验不能闲下来，一边做一遍看文献，慢慢就有了思路。

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6楼2015-10-19 00:45:49
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tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
建议送到公司来做，仅供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
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7楼2015-10-19 06:42:46
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-19 06:42:46
建议送到公司来做，仅供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154

谢谢您，我会考虑的

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8楼2015-10-19 07:05:08
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-19 00:06:49
你可以多选择几个宿主菌，做个小试，我总感觉软件预测的和实际操作有较大的区别；你的蛋白是细胞内表达的，要超声裂解或者benzonase消化，检测目的蛋白是否可溶，还是包涵体？

我要表达的蛋白是LSD1，分子量较大，大约110KDa。要超声破碎，应该不是包涵体。

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10楼2015-10-19 08:13:43
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