24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1555  |  回复: 11

高傲的范儿

金虫 (小有名气)


[求助] 如何选择蛋白表达宿主菌 已有2人参与

本人要做的课题是LSD1蛋白表达、纯化条件的优化,实验室现在所用的表达载体是pET28b,所用菌株是BL21(DE3)。我首先要优化的条件是蛋白表达宿主菌,看BL21(DE3)是否为最合适菌株,对于纷繁复杂的宿主菌,我看的是眼花缭乱,不知道如何选择。有些帖子说要根据表达蛋白去选择菌株,不知道主要看蛋白的什么性质,哪些特征去做选择。特求助于万能的虫友,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-19 00:45:49
你把手头有的E.coli宿主都试试,做实验不能闲下来,一边做一遍看文献,慢慢就有了思路。

非常感谢!我真的是思路有限,实验室所有人现在只用一种菌株,现在要去买新菌株,不知道如何下手了,如何挑了,现在准备订BL21(DE3)pLysS,Rosetta-gamiB(DE3)pLysS,Origami2(DE3)pLysS这几个菌株,不知道合不合适,试试吧!

发自小木虫Android客户端
9楼2015-10-19 08:10:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

victorLeo

木虫 (小有名气)

General Frontier

大多是BL21,但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽,当然这还是得依靠实际的表达情况来看,如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化,如果要是沉淀表达的话,就是包涵体了,纯化较难。如果BL21不行一般还有用rosseta菌株的。
希望探讨,多谢指教,讨厌说教,更讨厌不懂装懂。
2楼2015-10-16 16:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by victorLeo at 2015-10-16 16:51:29
大多是BL21,但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽,当然这还是得依靠实际的表达情况来看,如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化,如果要是沉淀表达的话,就是包涵体了,纯化较难。如果BL21不行一 ...

谢谢您的答复,我还有两个问题。信号肽的预测是用软件还是别的什么工具?蛋白在菌体内,需要超声裂解,这个属于包涵体吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2015-10-17 08:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
高傲的范儿: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-24 16:44:59
本帖内容被屏蔽

4楼2015-10-19 00:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

你把手头有的E.coli宿主都试试,做实验不能闲下来,一边做一遍看文献,慢慢就有了思路。

发自小木虫IOS客户端
5楼2015-10-19 00:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你把手头有的E.coli宿主都试试,做实验不能闲下来,一边做一遍看文献,慢慢就有了思路。

发自小木虫IOS客户端
6楼2015-10-19 00:45:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tolobio

新虫 (小有名气)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
建议送到公司来做,仅供参考:http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
7楼2015-10-19 06:42:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-19 06:42:46
建议送到公司来做,仅供参考:http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154

谢谢您,我会考虑的

发自小木虫Android客户端
8楼2015-10-19 07:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-19 00:06:49
你可以多选择几个宿主菌,做个小试,我总感觉软件预测的和实际操作有较大的区别;你的蛋白是细胞内表达的,要超声裂解或者benzonase消化,检测目的蛋白是否可溶,还是包涵体?

我要表达的蛋白是LSD1,分子量较大,大约110KDa。要超声破碎,应该不是包涵体。

发自小木虫Android客户端
10楼2015-10-19 08:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 高傲的范儿 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0805求调剂 +5 是水分 2026-03-31 5/250 2026-03-31 20:48 by yuq
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +3 元元青青 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:58 by vgtyfty
[考研] 求调剂:085600材料与化工,考材科基,总分319 +16 678lucky 2026-03-31 20/1000 2026-03-31 18:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业,初试351分,复试被刷求调剂! +9 真名有冰 2026-03-29 10/500 2026-03-31 18:01 by xhai2011
[考研] 343求调剂 +8 爱羁绊 2026-03-28 8/400 2026-03-31 16:12 by 不吃魚的貓
[考研] 353求调剂 +3 江上枫_26 2026-03-28 3/150 2026-03-31 15:53 by jp9609
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +13 辰沐5211314 2026-03-26 13/650 2026-03-31 14:37 by 记事本2026
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +8 哇呼哼呼哼 2026-03-27 10/500 2026-03-31 13:35 by Huaxue_Wang
[考研] 0817化工学硕调剂 +7 努力上岸中! 2026-03-31 7/350 2026-03-31 09:58 by nalakaiqi
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +25 稻妻小编 2026-03-26 25/1250 2026-03-30 20:11 by 滴滴上岸呀
[考研] 0703一志愿9,初试成绩:338,四六级已过,有科研经历,求调剂! +7 Zuhui0306 2026-03-25 7/350 2026-03-30 19:01 by 源_2020
[有机交流] 考研调剂 +8 watb 2026-03-26 8/400 2026-03-30 18:40 by 544594351
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +12 芋泥小铃铛 2026-03-28 12/600 2026-03-30 17:06 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +9 hanamiko 2026-03-26 11/550 2026-03-30 14:27 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +6 @taotao 2026-03-26 7/350 2026-03-30 10:43 by 我是小康
[考研] 295求调剂 +5 wei-5 2026-03-26 5/250 2026-03-30 08:34 by 探123
[考研] 275求调剂 +15 Micky11223 2026-03-25 20/1000 2026-03-29 20:44 by 唐沐儿
[考研] 数一英一271专硕(085401)求调剂,可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
信息提示
请填处理意见