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高傲的范儿

金虫 (小有名气)


[求助] 如何选择蛋白表达宿主菌 已有2人参与

本人要做的课题是LSD1蛋白表达、纯化条件的优化,实验室现在所用的表达载体是pET28b,所用菌株是BL21(DE3)。我首先要优化的条件是蛋白表达宿主菌,看BL21(DE3)是否为最合适菌株,对于纷繁复杂的宿主菌,我看的是眼花缭乱,不知道如何选择。有些帖子说要根据表达蛋白去选择菌株,不知道主要看蛋白的什么性质,哪些特征去做选择。特求助于万能的虫友,谢谢!
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-19 00:45:49
你把手头有的E.coli宿主都试试,做实验不能闲下来,一边做一遍看文献,慢慢就有了思路。

非常感谢!我真的是思路有限,实验室所有人现在只用一种菌株,现在要去买新菌株,不知道如何下手了,如何挑了,现在准备订BL21(DE3)pLysS,Rosetta-gamiB(DE3)pLysS,Origami2(DE3)pLysS这几个菌株,不知道合不合适,试试吧!

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9楼2015-10-19 08:10:18
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victorLeo

木虫 (小有名气)

General Frontier

大多是BL21,但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽,当然这还是得依靠实际的表达情况来看,如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化,如果要是沉淀表达的话,就是包涵体了,纯化较难。如果BL21不行一般还有用rosseta菌株的。
希望探讨,多谢指教,讨厌说教,更讨厌不懂装懂。
2楼2015-10-16 16:51:29
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by victorLeo at 2015-10-16 16:51:29
大多是BL21,但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽,当然这还是得依靠实际的表达情况来看,如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化,如果要是沉淀表达的话,就是包涵体了,纯化较难。如果BL21不行一 ...

谢谢您的答复,我还有两个问题。信号肽的预测是用软件还是别的什么工具?蛋白在菌体内,需要超声裂解,这个属于包涵体吗?

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3楼2015-10-17 08:02:54
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
高傲的范儿: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-24 16:44:59
本帖内容被屏蔽

4楼2015-10-19 00:06:49
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厚德求是

木虫 (著名写手)

你把手头有的E.coli宿主都试试,做实验不能闲下来,一边做一遍看文献,慢慢就有了思路。

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5楼2015-10-19 00:45:16
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厚德求是

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你把手头有的E.coli宿主都试试,做实验不能闲下来,一边做一遍看文献,慢慢就有了思路。

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6楼2015-10-19 00:45:49
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tolobio

新虫 (小有名气)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
建议送到公司来做,仅供参考:http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
7楼2015-10-19 06:42:46
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-19 06:42:46
建议送到公司来做,仅供参考:http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154

谢谢您,我会考虑的

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8楼2015-10-19 07:05:08
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高傲的范儿

金虫 (小有名气)


引用回帖:
4楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-19 00:06:49
你可以多选择几个宿主菌,做个小试,我总感觉软件预测的和实际操作有较大的区别;你的蛋白是细胞内表达的,要超声裂解或者benzonase消化,检测目的蛋白是否可溶,还是包涵体?

我要表达的蛋白是LSD1,分子量较大,大约110KDa。要超声破碎,应该不是包涵体。

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10楼2015-10-19 08:13:43
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