应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 如何选择蛋白表达宿主菌
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 1547  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

高傲的范儿

金虫 (小有名气)

[求助] 如何选择蛋白表达宿主菌 已有2人参与

本人要做的课题是LSD1蛋白表达、纯化条件的优化，实验室现在所用的表达载体是pET28b，所用菌株是BL21(DE3)。我首先要优化的条件是蛋白表达宿主菌，看BL21(DE3)是否为最合适菌株，对于纷繁复杂的宿主菌，我看的是眼花缭乱，不知道如何选择。有些帖子说要根据表达蛋白去选择菌株，不知道主要看蛋白的什么性质，哪些特征去做选择。特求助于万能的虫友，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-10-15 18:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 厚德求是 at 2015-10-19 00:45:49
你把手头有的E.coli宿主都试试，做实验不能闲下来，一边做一遍看文献，慢慢就有了思路。

非常感谢！我真的是思路有限，实验室所有人现在只用一种菌株，现在要去买新菌株，不知道如何下手了，如何挑了，现在准备订BL21(DE3)pLysS,Rosetta-gamiB(DE3)pLysS,Origami2(DE3)pLysS这几个菌株，不知道合不合适，试试吧！

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2015-10-19 08:10:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

victorLeo

木虫 (小有名气)

General Frontier
大多是BL21，但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽，当然这还是得依靠实际的表达情况来看，如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化，如果要是沉淀表达的话，就是包涵体了，纯化较难。如果BL21不行一般还有用rosseta菌株的。
赞一下 回复此楼
希望探讨，多谢指教，讨厌说教，更讨厌不懂装懂。
2楼2015-10-16 16:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by victorLeo at 2015-10-16 16:51:29
大多是BL21，但是目的基因的序列要生物信息预测下有无分泌信号肽，当然这还是得依靠实际的表达情况来看，如果要是上清表达那么可溶性的蛋白较易纯化，如果要是沉淀表达的话，就是包涵体了，纯化较难。如果BL21不行一 ...

谢谢您的答复，我还有两个问题。信号肽的预测是用软件还是别的什么工具？蛋白在菌体内，需要超声裂解，这个属于包涵体吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2015-10-17 08:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
高傲的范儿: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-10-24 16:44:59
本帖内容被屏蔽
4楼2015-10-19 00:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)
你把手头有的E.coli宿主都试试，做实验不能闲下来，一边做一遍看文献，慢慢就有了思路。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2015-10-19 00:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

厚德求是

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你把手头有的E.coli宿主都试试，做实验不能闲下来，一边做一遍看文献，慢慢就有了思路。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-19 00:45:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
建议送到公司来做，仅供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154
赞一下 回复此楼
7楼2015-10-19 06:42:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-19 06:42:46
建议送到公司来做，仅供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=154

谢谢您，我会考虑的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2015-10-19 07:05:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高傲的范儿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-10-19 00:06:49
你可以多选择几个宿主菌，做个小试，我总感觉软件预测的和实际操作有较大的区别；你的蛋白是细胞内表达的，要超声裂解或者benzonase消化，检测目的蛋白是否可溶，还是包涵体？

我要表达的蛋白是LSD1，分子量较大，大约110KDa。要超声破碎，应该不是包涵体。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2015-10-19 08:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 高傲的范儿 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 086000生物与医药298调剂求助 +3 元元青青 2026-03-31 5/250 2026-03-31 19:58 by vgtyfty
[考研] 085602 307分 求调剂 +10 不知道叫什么！ 2026-03-26 10/500 2026-03-31 19:53 by Dyhoer
[考研] 309求调剂 +17 谁不是少年 2026-03-29 17/850 2026-03-31 19:50 by mg1014
[考研] 375求调剂 +7 雨夏整夜 2026-03-29 7/350 2026-03-31 18:52 by xhai2011
[考研] 求调剂 生物学 377分 +6 zzll03 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:33 by 唐沐儿
[考研] 286分调剂 +11 Faune 2026-03-30 13/650 2026-03-31 17:28 by michael2011
[考研] 307分求调剂 +6 (o~o) 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:22 by 唐沐儿
[考研] 材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分 +11 dongfang59 2026-03-27 11/550 2026-03-31 16:51 by Wang200018
[考研] 材料科学与工程调剂 +13 深V宿舍吧 2026-03-30 14/700 2026-03-31 16:28 by hypershenger
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +10 26要上岸 2026-03-28 10/500 2026-03-31 16:04 by 记事本2026
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +12 材料学257求调剂 2026-03-28 13/650 2026-03-31 14:30 by 六翼TMR
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +6 恬淡ye 2026-03-31 7/350 2026-03-31 11:28 by 恬淡ye
[考研] 英一数一408，总分284，二战真诚求调剂 +3 12.27 2026-03-30 5/250 2026-03-31 00:47 by 不吃芒果17
[考研] 11408总分309，一志愿东南大学求调剂，不挑专业 +5 天赋带到THU 2026-03-29 6/300 2026-03-30 20:49 by dick_runner
[考研] 343求调剂085601 +3 要努力学习x 2026-03-29 3/150 2026-03-29 18:35 by wxiongid
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 298求调剂 +3 种圣赐 2026-03-29 3/150 2026-03-29 12:06 by longlotian
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 348求调剂 +4 小懒虫不懒了 2026-03-27 5/250 2026-03-27 12:47 by 果果妈咪
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭