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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 胶回收
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15853830932

木虫 (小有名气)

[交流] 胶回收 已有9人参与

请问一下，我用的axygen胶回收试剂盒，回收后做基因重组，一直不成功。是不是回收试剂盒里的试剂对核酸有影响？我猜测可能是有附着物之类的，使得重组酶结合不上去。不知哪位大神分析一下。。。

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If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
1楼 2015-10-15 09:40:18
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xiaodi1989

铜虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:10:02
我以前用qiagen的胶回收也有过类似的情况。推测的原因一是回收率过低，二是回收过程对片段末端有损伤。我现在只要目的片段比较单一，我就不叫回收，使用fermentas的fast digest酶切片段和质粒，在用fastap给质粒去磷酸化，然后连接。因为fermentas的buffer是单一的，所有酶只需要热灭活既可，省时简单。
最近的一次使用胶回收是因为我用的overlapping pcr，条带很杂。我用的是sigma的盒子，一次就连上了，克隆数也比较多。
祝你实验顺利。
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2楼2015-10-15 10:09:35
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普通回帖

15853830932

木虫 (小有名气)
谢谢啊，我再试试

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If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
3楼2015-10-16 08:33:24
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牛红

木虫 (小有名气)
★
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如果是从正规渠道买的提取试机盒的话，你没必要怀疑商业化试剂盒有问题，如果那么大牌子的核酸提取试机盒里有对核酸形成影响的试剂的话，那axygen可以考虑退出分子生物学领域了

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赢得不够是因为心智还不够高远
4楼2015-10-16 09:37:48
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 15853830932 at 2015-10-16 08:33:24
谢谢啊，我再试试

我的也是这样的结果，PCR之后条带还比较亮，但是切胶回收后再跑电泳就没有目的条带了，是不是回收效率太低了
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5楼2015-10-16 10:25:05
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jzhwang2007

至尊木虫 (文坛精英)
★
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试试不用胶回收，也许效果更好。
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6楼2015-10-16 23:13:51
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u0299025

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
改Qiagen或XX时代的胶回收试剂盒试试。
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7楼2015-10-16 23:19:46
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wxb2061

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 雨儿天0320 at 2015-10-16 10:25:05
我的也是这样的结果，PCR之后条带还比较亮，但是切胶回收后再跑电泳就没有目的条带了，是不是回收效率太低了...

对于回收，我每次做每次心跳加速！尤其拍胶时，就怕什么都没有！是自己操作太次？！

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走在途中……
8楼2015-10-17 10:14:48
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品茗听雨0530

铁虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:10:35
可以试试在最后一步加洗脱液时，放的时间久一些，充分洗脱；实在不行也可以用第一次洗脱的液体再过一遍柱子，二次洗脱。
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9楼2015-10-18 16:01:49
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tolobio

新虫 (小有名气)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
分子生物学方面的很多活现在都可以找公司来做啦，出结果快，也花不了多少钱，老板还高兴。仅供参考：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110
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10楼2015-10-19 12:49:36
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