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15853830932木虫 (小有名气)
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胶回收 已有9人参与
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请问一下，我用的axygen胶回收试剂盒，回收后做基因重组，一直不成功。是不是回收试剂盒里的试剂对核酸有影响？我猜测可能是有附着物之类的，使得重组酶结合不上去。不知哪位大神分析一下。。。 发自小木虫Android客户端 |
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15853830932
木虫 (小有名气)
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3楼2015-10-16 08:33:24
xiaodi1989
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:10:02
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:10:02
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我以前用qiagen的胶回收也有过类似的情况。推测的原因一是回收率过低，二是回收过程对片段末端有损伤。我现在只要目的片段比较单一，我就不叫回收，使用fermentas的fast digest酶切片段和质粒，在用fastap给质粒去磷酸化，然后连接。因为fermentas的buffer是单一的，所有酶只需要热灭活既可，省时简单。 最近的一次使用胶回收是因为我用的overlapping pcr，条带很杂。我用的是sigma的盒子，一次就连上了，克隆数也比较多。 祝你实验顺利。 |
2楼2015-10-15 10:09:35
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如果是从正规渠道买的提取试机盒的话，你没必要怀疑商业化试剂盒有问题，如果那么大牌子的核酸提取试机盒里有对核酸形成影响的试剂的话，那axygen可以考虑退出分子生物学领域了 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-10-16 09:37:48
5楼2015-10-16 10:25:05