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木虫 (小有名气)

[交流] 胶回收 已有9人参与

请问一下,我用的axygen胶回收试剂盒,回收后做基因重组,一直不成功。是不是回收试剂盒里的试剂对核酸有影响?我猜测可能是有附着物之类的,使得重组酶结合不上去。不知哪位大神分析一下。。。

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品茗听雨0530

铁虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:10:35
可以试试在最后一步加洗脱液时,放的时间久一些,充分洗脱;实在不行也可以用第一次洗脱的液体再过一遍柱子,二次洗脱。
9楼2015-10-18 16:01:49
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xiaodi1989

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-10-18 17:10:02
我以前用qiagen的胶回收也有过类似的情况。推测的原因一是回收率过低,二是回收过程对片段末端有损伤。我现在只要目的片段比较单一,我就不叫回收,使用fermentas的fast digest酶切片段和质粒,在用fastap给质粒去磷酸化,然后连接。因为fermentas的buffer是单一的,所有酶只需要热灭活既可,省时简单。
最近的一次使用胶回收是因为我用的overlapping pcr,条带很杂。我用的是sigma的盒子,一次就连上了,克隆数也比较多。
祝你实验顺利。
2楼2015-10-15 10:09:35
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15853830932

木虫 (小有名气)

If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
3楼2015-10-16 08:33:24
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牛红

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是从正规渠道买的提取试机盒的话,你没必要怀疑商业化试剂盒有问题,如果那么大牌子的核酸提取试机盒里有对核酸形成影响的试剂的话,那axygen可以考虑退出分子生物学领域了

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赢得不够是因为心智还不够高远
4楼2015-10-16 09:37:48
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