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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » DNA一端平末端一端粘性末端与切好的载体连接
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ray540213374

新虫 (初入文坛)

[求助] DNA一端平末端一端粘性末端与切好的载体连接 已有3人参与

DNA和载体都是一端粘性一端平末端，用的是T4 DNA  Ligase 连接酶连接，但是一直转化不出来，那位同学做过这方面的实验，求给个指导
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1楼 2015-10-15 09:20:17
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

DNA和载体都是一端粘性一端平末端

连接要加10%的peg4000，连接效率提高不少
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学习再学习，努力再努力。
5楼2015-10-26 15:14:41
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15853830932

木虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2015-10-15 18:17:17
具体步骤是啥？看看和我的一不一样

发自小木虫Android客户端
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If you shed tear when you miss the sun, you also miss the stars.
2楼2015-10-15 09:42:09
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han3028730

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:17:30
一端平末端一端粘性末端的连接还真没有做过，听说的也很少。你没有给出具体的实验操作，不好随便说。
但是我有几个看法：
1、平末端是酶切产生的吗？如果基因的平末端是PCR直接连接，5‘可能没有磷酸基团，导致双链DNA中只有一条链可以连接，严重影响连接效率。
2、平末端和粘性末端的连接效率不同，是否影响了连接。
3、一般来说，平末端连接体系中载体和基因的浓度不宜过高，否则影响自身环化连接。
4、在连接效率很低的情况下，感受态细胞的转化效率低是否是没有转化子的原因。
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3楼2015-10-15 11:02:21
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tolobio

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
建议送到公司做，速度快、价格还不贵，不成功不收费：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=110
仅供参考！
赞一下 回复此楼
4楼2015-10-15 12:47:20
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