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ray540213374

新虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 40.5
帖子: 19
在线: 5.3小时
虫号: 3956480
注册: 2015-07-06
专业: 蔬菜学与瓜果学

[求助] DNA一端平末端一端粘性末端与切好的载体连接已有3人参与

DNA和载体都是一端粘性一端平末端，用的是T4 DNA Ligase 连接酶连接，但是一直转化不出来，那位同学做过这方面的实验，求给个指导

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基因工程课程小结已经有20人回复

1楼 2015-10-15 09:20:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

han3028730

新虫 (初入文坛)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 2482.3
帖子: 24
在线: 15.7小时
虫号: 2647637
注册: 2013-09-11
专业: 系统生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:17:30

一端平末端一端粘性末端的连接还真没有做过，听说的也很少。你没有给出具体的实验操作，不好随便说。
但是我有几个看法：
1、平末端是酶切产生的吗？如果基因的平末端是PCR直接连接，5‘可能没有磷酸基团，导致双链DNA中只有一条链可以连接，严重影响连接效率。
2、平末端和粘性末端的连接效率不同，是否影响了连接。
3、一般来说，平末端连接体系中载体和基因的浓度不宜过高，否则影响自身环化连接。
4、在连接效率很低的情况下，感受态细胞的转化效率低是否是没有转化子的原因。