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DNA一端平末端一端粘性末端与切好的载体连接 已有3人参与
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| DNA和载体都是一端粘性一端平末端，用的是T4 DNA Ligase 连接酶连接，但是一直转化不出来，那位同学做过这方面的实验，求给个指导 |
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2楼2015-10-15 09:42:09
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-10-15 18:17:30
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一端平末端一端粘性末端的连接还真没有做过，听说的也很少。你没有给出具体的实验操作，不好随便说。 但是我有几个看法： 1、平末端是酶切产生的吗？如果基因的平末端是PCR直接连接，5‘可能没有磷酸基团，导致双链DNA中只有一条链可以连接，严重影响连接效率。 2、平末端和粘性末端的连接效率不同，是否影响了连接。 3、一般来说，平末端连接体系中载体和基因的浓度不宜过高，否则影响自身环化连接。 4、在连接效率很低的情况下，感受态细胞的转化效率低是否是没有转化子的原因。 |
3楼2015-10-15 11:02:21
【答案】应助回帖
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4楼2015-10-15 12:47:20
5楼2015-10-26 15:14:41