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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙看看pcr的结果？还要不要做T载体链接和蓝白斑筛选 已有2人参与

本人小白，以前也没做过分子实验，属于跨专业。导师让做植物内生真菌的实验，我用CTAB法提取了植物的总的DNA，用真菌的通用引物ITS1--ITS4，和真菌特异性引物ITS1F--ITS4，用20ul体系先试着跑了PCR，结果如下图。
    看文献说扩增出来的片段应该在500-800左右，现在跑的可以吗？一些论文用50ul体系跑完pcr后，进行了切胶，t载体链接，蓝白斑筛选后才送公司去测序，也有人说可以直接拿去给公司测序？请教下大家二者的区别，麻烦帮我看下我跑的pcr图有没有什么问题？多谢

大家帮忙看看pcr的结果？还要不要做T载体链接和蓝白斑筛选
IMG_20151012_134424.jpg


大家帮忙看看pcr的结果？还要不要做T载体链接和蓝白斑筛选-1
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1楼 2015-10-13 10:13:59
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by tolobio at 2015-10-15 12:20:34
这种情况下，肯定是要做克隆之后才能送到公司测序的。直接测的话，可以用16/18s的二代测序方法：http://www.tolobio.com/service_detail.php?id=161 （不需要克隆，但是也需要纯化，如果样不多的话，不合算）。
我 ...

我抽空先看看你说的

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7楼2015-10-16 23:38:51
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
天啊，没人回复啊

发自小木虫Android客户端
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2楼2015-10-14 18:41:15
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2015-10-14 18:52:18
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-14 18:52:18
用的多大的marker?200的吗？如果是2000的话条带是正确的，不过你marker跑的一点儿都不好，下一次跑电泳之前更换电泳液，最好还是连接T1载体做蓝白斑筛选正确再去测序，这样的话原基因的体系就会很大，以后再做其他的 ...

感谢回帖！我用的marker是2000的，marker确实没跑好，听取你的意见下次重新换下电泳液。我想再问下，目的片段在500—800bp间，可是这个区间的条带好像都连在一起，没怎么跑开，那切胶时，可以一起切下，然后在菌液pcr时，再用通用引物筛选吗？还是说切胶时就要把那些条带切开（感觉挨得太近了）？

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4楼2015-10-15 00:37:17
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