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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

[求助] 大家帮忙看看pcr的结果?还要不要做T载体链接和蓝白斑筛选 已有2人参与

本人小白,以前也没做过分子实验,属于跨专业。导师让做植物内生真菌的实验,我用CTAB法提取了植物的总的DNA,用真菌的通用引物ITS1--ITS4,和真菌特异性引物ITS1F--ITS4,用20ul体系先试着跑了PCR,结果如下图。
    看文献说扩增出来的片段应该在500-800左右,现在跑的可以吗?一些论文用50ul体系跑完pcr后,进行了切胶,t载体链接,蓝白斑筛选后才送公司去测序,也有人说可以直接拿去给公司测序?请教下大家二者的区别,麻烦帮我看下我跑的pcr图有没有什么问题?多谢

大家帮忙看看pcr的结果?还要不要做T载体链接和蓝白斑筛选
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大家帮忙看看pcr的结果?还要不要做T载体链接和蓝白斑筛选-1
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

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3楼2015-10-14 18:52:18
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

2楼2015-10-14 18:41:15
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wcq吴超群

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Eternity宇 at 2015-10-14 18:52:18
用的多大的marker?200的吗?如果是2000的话条带是正确的,不过你marker跑的一点儿都不好,下一次跑电泳之前更换电泳液,最好还是连接T1载体做蓝白斑筛选正确再去测序,这样的话原基因的体系就会很大,以后再做其他的 ...

感谢回帖!我用的marker是2000的,marker确实没跑好,听取你的意见下次重新换下电泳液。我想再问下,目的片段在500—800bp间,可是这个区间的条带好像都连在一起,没怎么跑开,那切胶时,可以一起切下,然后在菌液pcr时,再用通用引物筛选吗?还是说切胶时就要把那些条带切开(感觉挨得太近了)?

发自小木虫Android客户端
4楼2015-10-15 00:37:17
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
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5楼2015-10-15 01:16:00
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