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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问条带不清晰怎么回事？
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香香公主豆

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问条带不清晰怎么回事？ 已有1人参与

转化子PCR验证 5000bp 55-62℃梯度 26循环 模板1.5ul LA酶

请问条带不清晰怎么回事？
20151005 PCR 验证5078bp.jpg
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没有最好只有更好
1楼 2015-10-08 11:25:46
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huangxin2011

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
dimer的条带很亮，引物的利用率不高，模板浓度多少？可以减少引物用量，或者重新设计一下
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香香公主豆
2楼2015-10-08 11:56:26
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香香公主豆

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
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2楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-10-08 11:56:26
dimer的条带很亮，引物的利用率不高，模板浓度多少？可以减少引物用量，或者重新设计一下

20ul的体系，加了1.5ul模板，上下游引物分别1ul。
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没有最好只有更好
3楼2015-10-08 16:58:16
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huangxin2011

捐助贵宾 (小有名气)
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3楼: Originally posted by 香香公主豆 at 2015-10-08 16:58:16
20ul的体系，加了1.5ul模板，上下游引物分别1ul。...

不好意思，没注意你扩增的是大片段的，72℃延伸7min，最后一次10min，dNTP可以适量多一些，引物减半吧。多试试吧，祝好运！
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4楼2015-10-08 17:53:56
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香香公主豆

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-10-08 17:53:56
不好意思，没注意你扩增的是大片段的，72℃延伸7min，最后一次10min，dNTP可以适量多一些，引物减半吧。多试试吧，祝好运！...

好的 谢谢！
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没有最好只有更好
5楼2015-10-08 18:08:32
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huangxin2011

捐助贵宾 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 香香公主豆 at 2015-10-08 18:08:32
好的 谢谢！...

没事，pcr这种事情就像蛋炒饭，最简单也最困难。网上很多攻略的，科科。
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6楼2015-10-08 18:16:47
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