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香香公主豆

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问条带不清晰怎么回事? 已有1人参与

转化子PCR验证 5000bp 55-62℃梯度 26循环 模板1.5ul LA酶

请问条带不清晰怎么回事?
20151005 PCR 验证5078bp.jpg
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没有最好只有更好
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huangxin2011

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dimer的条带很亮,引物的利用率不高,模板浓度多少?可以减少引物用量,或者重新设计一下

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2楼2015-10-08 11:56:26
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香香公主豆

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-10-08 11:56:26
dimer的条带很亮,引物的利用率不高,模板浓度多少?可以减少引物用量,或者重新设计一下

20ul的体系,加了1.5ul模板,上下游引物分别1ul。
没有最好只有更好
3楼2015-10-08 16:58:16
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huangxin2011

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 香香公主豆 at 2015-10-08 16:58:16
20ul的体系,加了1.5ul模板,上下游引物分别1ul。...

不好意思,没注意你扩增的是大片段的,72℃延伸7min,最后一次10min,dNTP可以适量多一些,引物减半吧。多试试吧,祝好运!
4楼2015-10-08 17:53:56
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香香公主豆

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by huangxin2011 at 2015-10-08 17:53:56
不好意思,没注意你扩增的是大片段的,72℃延伸7min,最后一次10min,dNTP可以适量多一些,引物减半吧。多试试吧,祝好运!...

好的 谢谢!
没有最好只有更好
5楼2015-10-08 18:08:32
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huangxin2011

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5楼: Originally posted by 香香公主豆 at 2015-10-08 18:08:32
好的 谢谢!...

没事,pcr这种事情就像蛋炒饭,最简单也最困难。网上很多攻略的,科科。
6楼2015-10-08 18:16:47
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