| 查看: 2144 | 回复: 6 | ||
liushulu银虫 (小有名气)
|
[求助]
着急……土壤漆酶活性测定 已有3人参与
|
|
本人用ABTS法测定土壤漆酶活性，不知道是什么原因吸光度没有变化。 不知道是不是酶液没有提取出来，因为一直找不到合适的提取方法。 还请各位慷慨指教。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有106人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
2楼2016-03-15 22:07:23
3楼2017-07-19 20:11:18
晋鹏
版主 (知名作家)
- MolEPI: 6
- 应助: 626 (博士)
- 贵宾: 0.096
- 金币: 27590.2
- 散金: 1052
- 红花: 288
- 沙发: 2
- 帖子: 5663
- 在线: 726.4小时
- 虫号: 1183978
- 注册: 2011-01-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
【答案】应助回帖
|
1、以ABTS 为底物测定漆酶酶活是目前国外最为常见的方法之一。它有如下优点： (1) ABTS 易溶于水，在室温下放置6 个月仍较稳定。 (2) 其反应只有一步，即从ABTS 到它的阳离子自由基。ABTS 的阳离子自由基在水溶液中呈浅蓝绿色，且比较稳定，通常在几个小时或几天之内是稳定的。 (3) 在漆酶的作用下，ABTS 有色溶液的摩尔吸光系数较高，说明以其为底物测定的灵敏度较高。 (4) 到目前为止，还未有报道称ABTS 有致癌作用、诱变作用或是强烈的毒性。 2、Wolfenden and Wilson 分别对5 mmol/ L ABTS加入20μmol/ L 的抗坏血酸盐的测定溶液，于不同波长进行了光谱扫描，发现纯ABTS 呈浅蓝绿色，且在415 nm 处有吸收峰；而加了抗坏血酸盐的溶液为无色，在415 nm 处无吸收峰。 ABTS 的最大吸收峰在340 nm ，ABTS 的阳离子自由基的最大吸收峰在415 nm. 由此推断，在ABTS 的溶液中含有极少的ABTS 阳离子自由基，它们在更强的还原剂作用下被还原为ABTS。以ABTS 为底物进行漆酶的定量分析，通常在420 nm 下测定3 min 内吸光度的变化。用这种底物进行定量分析有一个缺点，即ABTS 阳离子自由基溶液的吸光度受溶液中未反应的ABTS 浓度的影响。 这就产生了一个问题：420 nm 下的摩尔吸光系数36 000 L/ (mol•cm) 是在纯ABTS 阳离子自由基的条件下求得的，而在实际测定反应中，ABTS 是过量的，这就导致人们低估了酶活。 这种影响不能忽视，因为反应终止时，溶液中至少还要有1 mmol/ L的ABTS。尽管用ABTS 为底物存在上述问题，但是它仍是漆酶酶活测定的最佳底物之一。一般以ABTS 为底物，采用Glycine2HCl 缓冲体系、乙酸2乙酸钠缓冲体系或柠檬酸盐2磷酸盐缓冲体系。如果菌种产生过氧化氢，为了准确测定，需加入一定量的过氧化氢酶，用以破坏过氧化氢。因为在代谢过程中，菌体自身产生过氧化氢可激发木质素过氧化物酶与锰过氧化物酶对ABTS 的氧化。 3、取酶液0.1ml，加入Hac-NaAc（pH4.5）缓冲液2.5ml，混匀，加入ABTS0.4ml，放置30s，每15s读取一次420nm下吸光值。共读取6～7个数值。以经验判断，若吸光值增长迅速，则将酶液稀释2～5倍再次测定，直至吸光值数值变化不是太快，且数值均在0.2～0.8之间。酶活的计算：吸光度变化的斜率×4000×稀释倍数。 |
4楼2017-07-19 21:26:18
5楼2018-06-03 00:10:26
6楼2020-07-25 19:16:09
7楼2020-07-25 19:16:57