| 查看: 5298 | 回复: 22 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
andywang6137木虫 (著名写手)
|
[求助]
最近TA克隆老是失败，请大家分析一下。 已有9人参与
|
||
PCR产物，胶回收后TA克隆，板子总长成这样，请高手分析一下原因。taq酶，宝生物的；胶回收试剂盒，全式金的；T载体，用过生工和全式金的。感受态细胞，全式金和自己制备的。之前还做出来了，上学的时候TA克隆也没出过问题，现在涂的板子老是长成下面图片这样。我自己动手做了一次，2个研究生做了一次都是下面的结果（图1：准备回收的目的片段；图2-4，平板菌液，学生发过来的，忘记那一个是水做的对照）。分析不出来原因，请高手分析一下。谢谢！ 0.jpg  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有263人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
andywang6137
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1552.5
- 散金: 309
- 红花: 25
- 帖子: 1651
- 在线: 460.3小时
- 虫号: 607807
- 注册: 2008-09-20
- 专业: 食品加工技术
|
首先谢谢你详细的回答。关于你分析的几个原因，我做一下说明，你看还有没有什么建议： 1、目的片段大约750bp，我用的是2K的marher。转化之后复苏时间1个小时左右，有的时候时间比较长（不超过2小时），没有集菌。涂板用量50ul。个人感觉摇菌时间这一块应该可以优化，缩短一下时间看看效果。 2、感受态，买的感受态和自己制备的感受态现在都出现这种状况。之前我自己做的，做出实验结果的感受态细胞也是目前这种情况。感受态这一块拿不准，买的感受态，自己制作的和学生做的，都出现这样的状况。 3、Amp的问题。这个之前没考虑到，一直以为可能是载体和感受态的问题，两个都换过还是没有解决问题。Amp准备重新定一只新的。涂板只用了Amp，IPTG和x-gal没有用。 4、阴阳性对照，学生报道说也是上述情况。上述图片其中一个是加水的对照。 5、请问板子中一团糊的也是因为浓度太高的缘故，还是其他原因？涂板用量已经缩小到50ul。涂板不均匀这个试验中很常见，挑到目的基因克隆子即可。一团糊的我一直难以理解，重新做新的培养基也是这个情况。要说浓度高，上学的时候经常做，浓度也有非常高的，可没有出现过一团糊的情况。 读书时做TA克隆基本没有失败过，目前出现这种情况换了一些试剂盒条件，始终没有找到有效的解决办法。 |
7楼2015-09-27 20:29:13
chenli1017
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2437.4
- 散金: 100
- 红花: 3
- 帖子: 58
- 在线: 70.7小时
- 虫号: 3158888
- 注册: 2014-04-23
- 专业: 果树学
2楼2015-09-25 18:33:37
songjie851
新虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1919.4
- 散金: 10
- 帖子: 47
- 在线: 45.5小时
- 虫号: 1752626
- 注册: 2012-04-12
- 专业: 色谱分析
3楼2015-09-25 20:00:12
cosmoslight
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1916.1
- 帖子: 67
- 在线: 12.8小时
- 虫号: 493621
- 注册: 2008-01-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2015-09-25 20:08:16
100