| 查看: 4944 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
andywang6137木虫 (著名写手)
|
[求助]
最近TA克隆老是失败，请大家分析一下。 已有9人参与
|
|
PCR产物，胶回收后TA克隆，板子总长成这样，请高手分析一下原因。taq酶，宝生物的；胶回收试剂盒，全式金的；T载体，用过生工和全式金的。感受态细胞，全式金和自己制备的。之前还做出来了，上学的时候TA克隆也没出过问题，现在涂的板子老是长成下面图片这样。我自己动手做了一次，2个研究生做了一次都是下面的结果（图1：准备回收的目的片段；图2-4，平板菌液，学生发过来的，忘记那一个是水做的对照）。分析不出来原因，请高手分析一下。谢谢！ 0.jpg  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有251人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
songjie851
新虫 (初入文坛)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1919.4
- 散金: 10
- 帖子: 47
- 在线: 45.5小时
- 虫号: 1752626
- 注册: 2012-04-12
- 专业: 色谱分析
3楼2015-09-25 20:00:12
chenli1017
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2437.4
- 散金: 100
- 红花: 3
- 帖子: 58
- 在线: 70.7小时
- 虫号: 3158888
- 注册: 2014-04-23
- 专业: 果树学
2楼2015-09-25 18:33:37
cosmoslight
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1916.1
- 帖子: 67
- 在线: 12.8小时
- 虫号: 493621
- 注册: 2008-01-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2015-09-25 20:08:16
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2015-09-27 23:03:59
andywang6137: 金币+30, 感谢详细解答 2015-10-08 10:42:31
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2015-09-27 23:03:59
andywang6137: 金币+30, 感谢详细解答 2015-10-08 10:42:31
|
看平板，似乎不是楼上几位说的简单的浓度太高，本人分析原因可能有以下介个： 1. 如果目的片段很短（小于500 bp），复苏时间较长（超过1小时），涂板前进行了集菌，会出现上述情况，如楼上几位所说，改进方法就是缩短复苏时间或者取消该步，然后减少涂板菌量； 2. 感受态问题，我曾出现过，制备感受态的菌污染，导致制备的感受态是含有质粒的，这样的话即使是用水做转化也会出现上述情况，建议排查； 3. 检查一下抗生素是否失效，这种情况我也遇到过，无论怎么转化均出现上述情况，后来发现抗生素失效，用了新的抗生素，立马正常了，如果使用的抗生素与质粒上的抗性基因不一致也会出现上述情况，建议排查； 4. 如果上述情况均不是主要原因，可以考虑蓝白斑筛选加阴阳性对照，找到产生上述情况的原因 祝好 |
5楼2015-09-26 10:08:53
