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andywang6137

木虫 (著名写手)

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[求助] 最近TA克隆老是失败，请大家分析一下。已有9人参与

PCR产物，胶回收后TA克隆，板子总长成这样，请高手分析一下原因。taq酶，宝生物的；胶回收试剂盒，全式金的；T载体，用过生工和全式金的。感受态细胞，全式金和自己制备的。之前还做出来了，上学的时候TA克隆也没出过问题，现在涂的板子老是长成下面图片这样。我自己动手做了一次，2个研究生做了一次都是下面的结果（图1：准备回收的目的片段；图2-4，平板菌液，学生发过来的，忘记那一个是水做的对照）。分析不出来原因，请高手分析一下。谢谢！

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1楼2015-09-25 18:00:34

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andywang6137

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-09-26 10:08:53
看平板，似乎不是楼上几位说的简单的浓度太高，本人分析原因可能有以下介个：
1. 如果目的片段很短（小于500 bp），复苏时间较长（超过1小时），涂板前进行了集菌，会出现上述情况，如楼上几位所说，改进方法就是缩 ...

你好，这是我重新做实验的结果，重新PCR扩增，胶回收，TA克隆，LB培养基（全部新买的试剂），Amp（用的还是之前买的生工的，新买的氨苄粉末由于超纯水仪器坏了，怕水质太差，没有配）。摇菌复苏1小时，涂板菌液取了50ul，没有富集。这是板子生长的结果（目的基因的，没做对照），挑去白斑检测结果全是空载体。一团一团糊一样的东西，我在网上也查找了一下，有点人说是感受态的死细胞。不知道是否正确？这种结果，是否需要将所有的试剂全换一遍？