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andywang6137

木虫 (著名写手)

[求助] 最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。 已有9人参与

PCR产物,胶回收后TA克隆,板子总长成这样,请高手分析一下原因。taq酶,宝生物的;胶回收试剂盒,全式金的;T载体,用过生工和全式金的。感受态细胞,全式金和自己制备的。之前还做出来了,上学的时候TA克隆也没出过问题,现在涂的板子老是长成下面图片这样。我自己动手做了一次,2个研究生做了一次都是下面的结果(图1:准备回收的目的片段;图2-4,平板菌液,学生发过来的,忘记那一个是水做的对照)。分析不出来原因,请高手分析一下。谢谢!

最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。
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最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-1
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最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-2
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最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-3
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andywang6137

木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 王平阳 at 2015-09-26 10:08:53
看平板,似乎不是楼上几位说的简单的浓度太高,本人分析原因可能有以下介个:
1. 如果目的片段很短(小于500 bp),复苏时间较长(超过1小时),涂板前进行了集菌,会出现上述情况,如楼上几位所说,改进方法就是缩 ...

你好,这是我重新做实验的结果,重新PCR扩增,胶回收,TA克隆,LB培养基(全部新买的试剂),Amp(用的还是之前买的生工的,新买的氨苄粉末由于超纯水仪器坏了,怕水质太差,没有配)。摇菌复苏1小时,涂板菌液取了50ul,没有富集。这是板子生长的结果(目的基因的,没做对照),挑去白斑检测结果全是空载体。一团一团糊一样的东西,我在网上也查找了一下,有点人说是感受态的死细胞。不知道是否正确?这种结果,是否需要将所有的试剂全换一遍?
最近TA克隆老是失败,请大家分析一下。-4
IMG_20151010_104659.jpg

19楼2015-10-11 22:27:19
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查看全部 23 个回答

chenli1017

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
浓度太高,稀释下,涂皿不均匀

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-25 18:33:37
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songjie851

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上正解,涂板时候少加点菌液,涂均匀点

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-09-25 20:00:12
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cosmoslight

金虫 (小有名气)

转化完直接涂板,应该没这么多

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-25 20:08:16
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