24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3115)
>虫友互识 (237)
>文献求助 (175)
>导师招生 (74)
>考博 (50)
>休闲灌水 (50)
>招聘信息布告栏 (44)
>博后之家 (34)
>硕博家园 (24)
>晶体 (19)
>论文投稿 (19)
>论文道贺祈福 (16)
>考研 (16)
>教师之家 (14)
>公派出国 (14)
>有机资源 (10)

返回列表

moroseman

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 7.5
帖子: 1
在线: 53分钟
虫号: 4026816
注册: 2015-08-17
专业: 生物化学

[求助] 提RNA中的DNA污染问题以及RT-PCR 已有1人参与

本人刚接触分子生物，导师让我做一个，目的基因的表达量的确定。
我第一次提了RNA，然后做了RT-PCR，出现了很多问题，希望各位同学能给予我一些帮助。
1. 我是用simgen的植物总RNA提取试剂盒，提了RNA，结果如图1.RNA有降解，而且浓度严重不足，而我加的样品量也是足够的。手套，抢头，移液枪都是进口。我师姐提的RNA都是比较亮的，而我的严重不足。想询问下各位大神，如何提高RNA浓度？RNA浓度是100ng per ul 77ng per ul
2. 接下来又做了，RT-PCR，如图2，1.RNA 2.空 3.cDNA 4.DNA消化的RNA，5.RNA 用了mix做PCR，6.cDNA 用了MIX做PCR，7.DNA消化过的RNA。后三个都是用来MIX：是一种用于PCR只需加模板引物就行的混合液。跑胶跑了，3ul。问题来了，RNA中混了genemicDNA。
3. 为了检测 RNA中混有的genemicDNA量的大小。于是我又做了一次PCR 35cycle。如图3 control 1.RNA模板PCR(无反转录) 2.RNA 模板 mix（无反转录） 3.cDNA模板 4. cDNA mix
RNA加了50ng cDNA 1ul由于RNA 80ng 20ul体系做RT，姑且算作cDNA为40ng per ul，结果也是不理想，还能继续往下做吗？
Note：实验室的DNA消化试剂盒出现了问题。
如何减少RNA中DNA的污染，以及提高RNA的浓度

1.jpg