| 查看: 3771 | 回复: 1 | ||
[求助]
提RNA中的DNA污染问题以及RT-PCR 已有1人参与
|
|
本人刚接触分子生物，导师让我做一个，目的基因的表达量的确定。 我第一次提了RNA，然后做了RT-PCR，出现了很多问题，希望各位同学能给予我一些帮助。 1. 我是用simgen的植物总RNA提取试剂盒，提了RNA，结果如图1.RNA有降解，而且浓度严重不足，而我加的样品量也是足够的。手套，抢头，移液枪都是进口。我师姐提的RNA都是比较亮的，而我的严重不足。想询问下各位大神，如何提高RNA浓度？RNA浓度是100ng per ul 77ng per ul 2. 接下来又做了，RT-PCR，如图2，1.RNA 2.空 3.cDNA 4.DNA消化的RNA，5.RNA 用了mix做PCR，6.cDNA 用了MIX做PCR，7.DNA消化过的RNA。后三个都是用来MIX：是一种用于PCR只需加模板引物就行的混合液。跑胶跑了，3ul。问题来了，RNA中混了genemicDNA。 3. 为了检测 RNA中混有的genemicDNA量的大小。于是我又做了一次PCR 35cycle。如图3 control 1.RNA模板PCR(无反转录) 2.RNA 模板 mix（无反转录） 3.cDNA模板 4. cDNA mix RNA加了50ng cDNA 1ul由于RNA 80ng 20ul体系做RT，姑且算作cDNA为40ng per ul，结果也是不理想，还能继续往下做吗？ Note：实验室的DNA消化试剂盒出现了问题。 如何减少RNA中DNA的污染，以及提高RNA的浓度  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有223人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
uulovelyuu
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 15171.7
- 红花: 34
- 帖子: 1346
- 在线: 309.7小时
- 虫号: 2444856
- 注册: 2013-05-02
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2015-10-21 10:17:25
25