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提RNA中的DNA污染问题以及RT-PCR 已有1人参与
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本人刚接触分子生物，导师让我做一个，目的基因的表达量的确定。 我第一次提了RNA，然后做了RT-PCR，出现了很多问题，希望各位同学能给予我一些帮助。 1. 我是用simgen的植物总RNA提取试剂盒，提了RNA，结果如图1.RNA有降解，而且浓度严重不足，而我加的样品量也是足够的。手套，抢头，移液枪都是进口。我师姐提的RNA都是比较亮的，而我的严重不足。想询问下各位大神，如何提高RNA浓度？RNA浓度是100ng per ul 77ng per ul 2. 接下来又做了，RT-PCR，如图2，1.RNA 2.空 3.cDNA 4.DNA消化的RNA，5.RNA 用了mix做PCR，6.cDNA 用了MIX做PCR，7.DNA消化过的RNA。后三个都是用来MIX：是一种用于PCR只需加模板引物就行的混合液。跑胶跑了，3ul。问题来了，RNA中混了genemicDNA。 3. 为了检测 RNA中混有的genemicDNA量的大小。于是我又做了一次PCR 35cycle。如图3 control 1.RNA模板PCR(无反转录) 2.RNA 模板 mix（无反转录） 3.cDNA模板 4. cDNA mix RNA加了50ng cDNA 1ul由于RNA 80ng 20ul体系做RT，姑且算作cDNA为40ng per ul，结果也是不理想，还能继续往下做吗？ Note：实验室的DNA消化试剂盒出现了问题。 如何减少RNA中DNA的污染，以及提高RNA的浓度  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
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