| 查看: 3699 | 回复: 1 | ||
[求助]
提RNA中的DNA污染问题以及RT-PCR 已有1人参与
|
|
本人刚接触分子生物，导师让我做一个，目的基因的表达量的确定。 我第一次提了RNA，然后做了RT-PCR，出现了很多问题，希望各位同学能给予我一些帮助。 1. 我是用simgen的植物总RNA提取试剂盒，提了RNA，结果如图1.RNA有降解，而且浓度严重不足，而我加的样品量也是足够的。手套，抢头，移液枪都是进口。我师姐提的RNA都是比较亮的，而我的严重不足。想询问下各位大神，如何提高RNA浓度？RNA浓度是100ng per ul 77ng per ul 2. 接下来又做了，RT-PCR，如图2，1.RNA 2.空 3.cDNA 4.DNA消化的RNA，5.RNA 用了mix做PCR，6.cDNA 用了MIX做PCR，7.DNA消化过的RNA。后三个都是用来MIX：是一种用于PCR只需加模板引物就行的混合液。跑胶跑了，3ul。问题来了，RNA中混了genemicDNA。 3. 为了检测 RNA中混有的genemicDNA量的大小。于是我又做了一次PCR 35cycle。如图3 control 1.RNA模板PCR(无反转录) 2.RNA 模板 mix（无反转录） 3.cDNA模板 4. cDNA mix RNA加了50ng cDNA 1ul由于RNA 80ng 20ul体系做RT，姑且算作cDNA为40ng per ul，结果也是不理想，还能继续往下做吗？ Note：实验室的DNA消化试剂盒出现了问题。 如何减少RNA中DNA的污染，以及提高RNA的浓度  1.jpg  2.jpg  3.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有267人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
uulovelyuu
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 15171.7
- 红花: 34
- 帖子: 1346
- 在线: 309.7小时
- 虫号: 2444856
- 注册: 2013-05-02
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2015-10-21 10:17:25
