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a353300205

新虫 (初入文坛)

[交流] 请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题 已有9人参与

大家好,本人新手刚做实验不久,筛了一批多态性引物,现在在跑群体的DNA,前两张图片跑得很好了没有问题读带非常清楚。

不知道为什么接下来两天跑的两次(如后面4图),会跑成这样。请大家帮我分析下

因为这几次都是连着跑的,不知道怎么突然出现这种问题的。
我自己的猜测是,1.因为我的群体DNA稀释完以后是放到-20℃的冰柜中的,每次做PCR都是拿出来用完再放回去,不知道这样反复冻融几次是不是就降解了,一共拿出拿进这样5次左右。

2.染胶的时候刚开始我看胶变浅黄色点样口的底部会有明显的条带,染完后就成这样了,不知道是不是没跑下来的问题。。但是跑胶的时候是看到往下走的。这个不太懂。

3.操作的问题的话,每次都是一样的,PCR的体系也一样的,酶是最后加,loadingbuffer加的也是一样的,染胶显色的东西都是固定不变的。

然后想不出来什么条理清晰的问题了,具体问题请大家帮我分析看好么。最后由于我是刚注册的号都发不了帖,这个账号还是借的同学的只有3个金币,没法悬赏了对不住

前两张图是第一次做成功的,3,4图是第二次,5,6图是刚刚做的。

请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题
2.jpg


请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题-1
1.jpg


请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题-2
DSC_0947.jpg


请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题-3
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请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题-4
DSC_0951.jpg


请大家帮帮忙,看看这几板胶跑的出了什么问题-5
DSC_0950.jpg
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

★
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凝胶电泳看一下,排除PCR本身的问题。如果PCR没有问题,那就是PAGE胶的问题,现配HNO3,NA2CO3重新跑PAGE。如果是PCR问题,要么引物问题,要么DNA问题,大部分可能是DNA了,你反复冻融了多次(DNA跑凝胶电泳看一下有无降解)。
偶时晴天偶时雨
8楼2015-09-23 23:22:19
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查看全部 10 个回答

反应链

新虫 (正式写手)

★
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这是不是胶有问题啊?
2楼2015-09-21 15:02:53
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铁树开花

捐助贵宾 (小有名气)

纳米磁珠 试剂盒 体外诊断

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看看胶和缓冲液是不是和第一次的不一样

发自小木虫Android客户端
http://www.lnjnbio.com/
5楼2015-09-22 12:48:44
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)

★
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6楼2015-09-22 14:34:11
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