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runye2015

新虫 (小有名气)

[交流] 普通PCR产物做标准曲线

如题,荧光定量PCR,由于种种原因,没有标准菌株,
1、用待测样本的普通PCR产物做标准曲线,这种方法除了容易降解,重复性不好之外,还有那些问题呢,需要注意什么问题?求经验者指点,
2、如果发文章的话,引物特异性验证,一定要用标准品做琼脂糖凝胶电泳验证吗?
3、临床实验,每组患者样本数最少是多少呢?

问题比较多,还有些无厘头,求各位大神帮忙!
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runye2015

新虫 (小有名气)

2楼2015-09-15 11:19:13
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然处

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用产物做标准,没听说过啊,浓度怎么确定的。引物验证也可以看溶解曲线,文章有要求的话可以跑个电泳,也不麻烦。至于样品数,看别人的文章吧,我也不清楚。

发自小木虫Android客户端
迷茫会结束的
3楼2015-09-16 07:27:04
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baichi121234

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

4楼2015-09-16 07:50:48
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sls19881024

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1、这个做标去的话浓度咋确定呢
2、引物验证用溶解曲线就可以
小松
5楼2015-09-16 09:47:00
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zly19912002

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
话说标曲不是要构建标品吗?自己的样本结果可能不可信吧
随遇而安
6楼2015-09-17 17:17:48
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lianfeng1107

木虫 (小有名气)

完全可以。
7楼2015-09-18 11:35:27
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为心而生

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以pcr产物构建质粒,然后用质粒做标准品,再去构建标准曲线
8楼2015-12-02 20:18:44
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