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loveming313

新虫 (小有名气)

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[交流] 请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？

请大家帮帮忙，这个PCR程序是什么意思？如何在PCR仪上设置？
1.这是属于跳跃PCR ,还是什么?
2.这种PCR用普通taq酶可以P吗？
3.在PCR仪上如何设置这个程序？
4.PCR程序中变性、退火、延伸的反应时间是怎么确定的？和哪些因素（如酶、扩增片段、模板）有关？

搜狗截图15年09月09日PCR程序.png

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1楼 2015-09-09 17:07:27

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loveming313

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

10楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-10 13:08:22

touchdown不就是你平时怎么P还怎么P，程序多一段每循环降温么？你要是仪器不支持，或者找不到会的人，一个个循环自己输也行嘛。问这么久输都输完了。
Biorad，ABI的机器都有oC/cycles选项，自己找

大侠你好，我现在能跑出666bp的野生型条带【如图，Marker为DL100】；但850bp的条带P不出来，很让人着急。
666bp目的片段的前引物是TCA GTT TCC TTG GCT ACC AGA，后引物TTC CAT TAC AGT CAC TCC AGA TGT（后引物是共用的）
850bp目的片段的前引物是TGC CTG CTC TTT ACT GAA GG，后引物是TTC CAT TAC AGT CAC TCC AGA TGT，这个扩增条件怎么设呢？
我实在是愚笨，烦请您给个建议吧