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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助荧光定量PCR阴性对照出阳性结果,并且很有梯度 已有1人参与

求助各位前辈:
做荧光定量很久终于出结果发现好像是污染啦。

5个基因做标准曲线,刚开始怎么扩都没有扩增曲线,后来终于有扩增曲线发现阴性对照ct值在35,内参16s  ct值大概是26。关键是标准曲线5个浓度还是由梯度的。

换过地方加样,换过mix,换过引物和水。阴性对照依然出结果。

求前辈指条明路。
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

有没有在做的。讨论一下
2楼2015-09-07 11:18:38
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

是5个引物在做的时候全部污染了吗?溶解曲线跟目的条带位置一样
3楼2015-09-07 11:20:16
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

4楼2015-09-09 17:01:56
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许彦

木虫 (正式写手)

5楼2015-09-10 07:16:18
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helios_hj

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质控可以做个阴性多照和空白对照,阴性对照和标本一起进入核酸提取程序,空白对照是除了核酸模板不加,其他反应体系都有,这样两个对照可以监控提取核酸和配置反应体系两个环节

发自小木虫Android客户端
Ifyouthinkyoucan,youcan!!!
6楼2015-09-10 07:25:21
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

我自己做的退火温度比文献上给的要低8度这是属于正常吗
7楼2015-09-11 16:06:01
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