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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助荧光定量PCR阴性对照出阳性结果，并且很有梯度
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助荧光定量PCR阴性对照出阳性结果，并且很有梯度 已有1人参与

求助各位前辈：
做荧光定量很久终于出结果发现好像是污染啦。

5个基因做标准曲线，刚开始怎么扩都没有扩增曲线，后来终于有扩增曲线发现阴性对照ct值在35，内参16s  ct值大概是26。关键是标准曲线5个浓度还是由梯度的。

换过地方加样，换过mix，换过引物和水。阴性对照依然出结果。

求前辈指条明路。
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1楼 2015-09-07 10:25:27
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)
有没有在做的。讨论一下
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2楼2015-09-07 11:18:38
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)
是5个引物在做的时候全部污染了吗？溶解曲线跟目的条带位置一样
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3楼2015-09-07 11:20:16
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)
求助
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4楼2015-09-09 17:01:56
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许彦

木虫 (正式写手)
是不是环境污染了！

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5楼2015-09-10 07:16:18
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helios_hj

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质控可以做个阴性多照和空白对照，阴性对照和标本一起进入核酸提取程序，空白对照是除了核酸模板不加，其他反应体系都有，这样两个对照可以监控提取核酸和配置反应体系两个环节

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Ifyouthinkyoucan,youcan!!!
6楼2015-09-10 07:25:21
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小佳佳佳佳

新虫 (初入文坛)
我自己做的退火温度比文献上给的要低8度这是属于正常吗
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7楼2015-09-11 16:06:01
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