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5150416新虫 (小有名气)
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PCR目的基因
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问一下大家在PCR时候有没有遇到像我这样的情况，就是怎么p就是p不出来，引物是重新换的，还是p不出来，你们将退货温度调到比设计的高多少或少多少，大家有木有好的方法，还请大家给个建议，谢谢！ 发自小木虫Android客户端 |
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 虫友问答-分子生物 |
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退火温度:55-65，有段时间我的pcr也是怎么也p不出来，后来加大了模板浓度，才过得pcr产物，或者更换好一点的酶试试。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2015-09-07 07:51:25
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
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5150416: 金币+5 2015-09-07 09:53:40
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哎~ 首先确定你的模板有没有降解，提取多长时间了 其次引物不是换新的就可以的，引物特异性需要验证 然后关于酶，不知道你的目的片段大小多少，GC含量如何，建议先看看如何选酶根据大小和下游应用选择 http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html，一般的热启动聚合酶能够满足扩增， 最好按照酶的说明书设置反应条件和配置反应体系，一般不是一次成功的话，摸索退火温度，如果杂带多，升高退火温度如果没有条带可降低退火温度，另外根据目的片段大小配置合适胶浓度，，，太多了具体的看看一下文档吧 有问题解决和提高特异性的方法总结，还有一篇是关于操作的，有很多注意的点 http://www.detaibio.com/topics/pcr-sop.html http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html |
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5150416
6楼2015-09-07 09:36:02
2楼2015-09-07 00:32:16
阿Q~~
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