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5150416

新虫 (小有名气)

[交流] PCR目的基因

问一下大家在PCR时候有没有遇到像我这样的情况,就是怎么p就是p不出来,引物是重新换的,还是p不出来,你们将退货温度调到比设计的高多少或少多少,大家有木有好的方法,还请大家给个建议,谢谢!

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nianmo0599

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
模板的质量也很重要,还有换好点的酶试试

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5楼2015-09-07 08:55:33
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nianmo0599

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 5150416 at 2015-09-07 09:55:21
都换了,可是还是不行,现在还是在摸索温度
...

我的经验是模板好的话随便设计两对引物试几个温度就出来了,我一般先用55,扩不出来就用62,64试一下。如果模板不好,试再多温度也白搭。还有可以考虑重新设计引物,不要用primer等设计软件,因为评分再高也不一定说明其特异性好,我都是随便乱选的引物。额~个人意见,仅供参考。

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13楼2015-09-07 11:34:51
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