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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR目的基因
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5150416

新虫 (小有名气)

[交流] PCR目的基因

问一下大家在PCR时候有没有遇到像我这样的情况，就是怎么p就是p不出来，引物是重新换的，还是p不出来，你们将退货温度调到比设计的高多少或少多少，大家有木有好的方法，还请大家给个建议，谢谢！

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1楼 2015-09-06 15:34:06
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5150416

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-09-07 09:36:02
哎~
首先确定你的模板有没有降解，提取多长时间了
其次引物不是换新的就可以的，引物特异性需要验证
然后关于酶，不知道你的目的片段大小多少，GC含量如何，建议先看看如何选酶根据大小和下游应用选择 http://ww ...

谢谢

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8楼2015-09-07 09:54:31
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jl.liu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议使用梯度PCR设置线性梯度温度进行退火，找出最适的退火温度。还有就是你的反应体系是怎么的，也有关系，可能是引物不好，或者模板加太多了。
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2楼2015-09-07 00:32:16
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
路过的看了一下，帮顶，祝福你好运！~~~~~~~~~~~~~~~~~~
赞一下 回复此楼
自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
3楼2015-09-07 07:25:16
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chenyuanxmc

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度:55-65，有段时间我的pcr也是怎么也p不出来，后来加大了模板浓度，才过得pcr产物，或者更换好一点的酶试试。

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4楼2015-09-07 07:51:25
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