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5150416

新虫 (小有名气)

[交流] PCR目的基因

问一下大家在PCR时候有没有遇到像我这样的情况,就是怎么p就是p不出来,引物是重新换的,还是p不出来,你们将退货温度调到比设计的高多少或少多少,大家有木有好的方法,还请大家给个建议,谢谢!

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5150416

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-09-07 09:36:02
哎~
首先确定你的模板有没有降解,提取多长时间了
其次引物不是换新的就可以的,引物特异性需要验证
然后关于酶,不知道你的目的片段大小多少,GC含量如何,建议先看看如何选酶根据大小和下游应用选择 http://ww ...

谢谢

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8楼2015-09-07 09:54:31
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查看全部 19 个回答

jl.liu

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议使用梯度PCR设置线性梯度温度进行退火,找出最适的退火温度。还有就是你的反应体系是怎么的,也有关系,可能是引物不好,或者模板加太多了。
2楼2015-09-07 00:32:16
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)

路过的看了一下,帮顶,祝福你好运!~~~~~~~~~~~~~~~~~~
自强不息,厚德载物;独立精神,自由思想。
3楼2015-09-07 07:25:16
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chenyuanxmc

金虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
退火温度:55-65,有段时间我的pcr也是怎么也p不出来,后来加大了模板浓度,才过得pcr产物,或者更换好一点的酶试试。

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4楼2015-09-07 07:51:25
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