24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2847  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 转化子菌落PCR正确,但是菌液提取重组质粒一直提不到是什么原因? 已有6人参与

最近做质粒重组,转化子菌落PCR正确,有目的条带,但是条带不是很亮的那种,然后挑取转化子菌液培养,抗生素的浓度足够高,提取质粒,总是在第三步十分钟离心之后,上清液都有些浑浊,离心力足够大,时间足够长继续提取检测,都没有提取到质粒。试剂盒没有问题,因为同批转化的载体质粒能提取出来。
       急求各位有遇到类似问题的给出宝贵的意见,不胜感激。
回复此楼
喜欢生物,所以想好好研究下去!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2015-09-08 08:12:44
如果连接失败的话,为啥会在有抗性的平板上有单菌落呢?感受态没有抗性,只有质粒载体有抗性呢?...

那是载体自连或者载体没有酶切完全的结果
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
18楼2015-09-10 11:56:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

chenyuanxmc

金虫 (著名写手)

没遇到过这种情况,会不会是杂菌啊

发自小木虫Android客户端
2楼2015-09-03 13:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-04 22:58:26
因为你用的是目的基因的PCR引物,所以菌落PCR都是假阳性。如果你想菌落PCR鉴定的话,就用载体上的引物,别用你目的基因的引物。
3楼2015-09-03 15:54:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
“转化子菌落PCR正确,有目的条带,但是条带不是很亮的那种”----基本都是假阳性,不用继续往下做了。

做菌落PCR,最好是用载体上的引物,或者一条载体上的一条基因特异引物搭配
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2015-09-04 05:06:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 4/200 2026-03-30 21:48 by zhuangyan123
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
[考研] 322求调剂:一志愿湖南大学 材料与化工(085600),已过六级。 +9 XX小邓 2026-03-29 9/450 2026-03-30 17:18 by limeifeng
[考研] 329求调剂,一志愿西北工业大学,材料工程(085601) +5 小小机灵虫 2026-03-29 11/550 2026-03-30 15:02 by Wang200018
[考研] 283求调剂(080500) +14 A child 2026-03-27 14/700 2026-03-30 12:06 by 探123
[考研] 332求调剂 +6 Lyy930824@ 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:53 by 1172367218
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 283求调剂 +7 A child 2026-03-28 7/350 2026-03-28 12:05 by zllcz
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 调剂 +3 李嘉图·S·路 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:19 by wangjy2002
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 打过很多竞赛,085406控制工程300分,求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
信息提示
请填处理意见