应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因组DNA为模板进行PCR，第一次扩出来了，后面怎么重复都不行。
353/4返回列表上一页1234下一页
查看: 3830  |  回复: 34
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

王栋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 枭翔 at 2015-09-02 13:44:41
首先，看看你的模板DNA，跑个电泳看看，是不是降解。最好是重新提取一次。引物一般没啥问题，可以最后考虑。扩增体系里面加上5-10%的DMSO。可以用你第一次的产物作为模板进行扩增，这样万无一失，如果还是不行，说明 ...

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
21楼2015-09-03 22:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by ufo29119690 at 2015-09-02 06:33:28
应该是后来提取的DNA质量不好  有降解 或者浓度低

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
22楼2015-09-03 22:42:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 327351493 at 2015-09-02 07:43:13
重新换一批新的引物，酶等，用第一次P的条件进行，如果能P出来，可能就是这些物质降解了，如果没P出来，可能是模板出问题了

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
23楼2015-09-03 22:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by evangelina at 2015-08-28 17:00:26
大概是模板问题了，可能有些phenol或者蛋白没有去掉，影响PCR

其实你既然已经扩出来了，就干脆用PCR产物做模板重做啦

真的倒霉出突变了你就把它给改过来嘛，总比啥都不出来要好

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
24楼2015-09-03 22:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-09-01 13:59:18
基因组DNA点样5ul，已经降解了！重新抽提吧！不管选择那种抽提方法，一定要严格操作，避免降解！...

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
25楼2015-09-03 22:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yfd900825

银虫 (正式写手)
多做几管合并回收呗，不然就是优化体系了，引物浓度及退火调整一下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
26楼2015-09-03 23:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufo29119690

金虫 (小有名气)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 王栋 at 2015-09-03 22:42:11
谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~
...

用PCR产物做模板 再P一次

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
27楼2015-09-04 08:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaochaosoul

新虫 (初入文坛)
试试巢扩

发自小木虫Android客户端
回复此楼
28楼2015-09-04 10:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaochaosoul

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

基因组DNA不确定性太多，巢扩可以改善这个情况。重新设计一对巢扩引物，再以巢扩出来的目的片段为模板，就可以了。我自己这么p过3000多的片段

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
29楼2015-09-04 12:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枭翔

金虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 王栋 at 2015-09-03 22:41:51
谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~
...

一般来说30个循环就足够了，如果说PCR浓度不高，是你的胶回收产物不高？还是直接PCR回收的产物浓度不高？如果是第一个，可能是胶回收的手法问题，一般来说，胶回收会损失50%。如果是第二个，那么是你的PCR条件不合适，做个touchdown吧，效果应该不错的。
赞一下 回复此楼
30楼2015-09-05 21:11:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王栋 的主题更新
353/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +13 顾九笙要谦虚 2026-03-24 19/950 2026-03-26 13:30 by 小小麦片
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 312求调剂 +5 上岸吧ZJY 2026-03-22 8/400 2026-03-26 13:12 by 公瑾逍遥
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 281求调剂 +4 Koxui 2026-03-24 5/250 2026-03-25 11:38 by userper
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 材料学求调剂 +6 Stella_Yao 2026-03-20 6/300 2026-03-25 00:37 by baoball
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭