24小时热门版块排行榜    

查看: 3579  |  回复: 34

王栋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 枭翔 at 2015-09-02 13:44:41
首先,看看你的模板DNA,跑个电泳看看,是不是降解。最好是重新提取一次。引物一般没啥问题,可以最后考虑。扩增体系里面加上5-10%的DMSO。可以用你第一次的产物作为模板进行扩增,这样万无一失,如果还是不行,说明 ...

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
21楼2015-09-03 22:41:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by ufo29119690 at 2015-09-02 06:33:28
应该是后来提取的DNA质量不好  有降解 或者浓度低

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
22楼2015-09-03 22:42:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by 327351493 at 2015-09-02 07:43:13
重新换一批新的引物,酶等,用第一次P的条件进行,如果能P出来,可能就是这些物质降解了,如果没P出来,可能是模板出问题了

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
23楼2015-09-03 22:42:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by evangelina at 2015-08-28 17:00:26
大概是模板问题了,可能有些phenol或者蛋白没有去掉,影响PCR

其实你既然已经扩出来了,就干脆用PCR产物做模板重做啦

真的倒霉出突变了你就把它给改过来嘛,总比啥都不出来要好

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
24楼2015-09-03 22:44:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王栋

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
13楼: Originally posted by 穿白大褂约会 at 2015-09-01 13:59:18
基因组DNA点样5ul,已经降解了!重新抽提吧!不管选择那种抽提方法,一定要严格操作,避免降解!...

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~

发自小木虫Android客户端
25楼2015-09-03 22:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yfd900825

银虫 (正式写手)

多做几管合并回收呗,不然就是优化体系了,引物浓度及退火调整一下

[ 发自小木虫客户端 ]
26楼2015-09-03 23:15:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ufo29119690

金虫 (小有名气)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 王栋 at 2015-09-03 22:42:11
谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~
...

用PCR产物做模板 再P一次

发自小木虫Android客户端
27楼2015-09-04 08:57:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaochaosoul

新虫 (初入文坛)

28楼2015-09-04 10:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chaochaosoul

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

基因组DNA不确定性太多,巢扩可以改善这个情况。重新设计一对巢扩引物,再以巢扩出来的目的片段为模板,就可以了。我自己这么p过3000多的片段

发自小木虫Android客户端
29楼2015-09-04 12:03:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枭翔

金虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 王栋 at 2015-09-03 22:41:51
谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高,该怎么解决呢?谢谢前辈~
...

一般来说30个循环就足够了,如果说PCR浓度不高,是你的胶回收产物不高?还是直接PCR回收的产物浓度不高?如果是第一个,可能是胶回收的手法问题,一般来说,胶回收会损失50%。如果是第二个,那么是你的PCR条件不合适,做个touchdown吧,效果应该不错的。
30楼2015-09-05 21:11:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 王栋 的主题更新
信息提示
请填处理意见