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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因组DNA为模板进行PCR，第一次扩出来了，后面怎么重复都不行。
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goodluky

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板DNA降解为片段，建议重新提取模板。

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11楼2015-08-31 12:28:06
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
12楼2015-09-01 13:55:31
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穿白大褂约会

禁言 (小有名气)
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

王栋
13楼2015-09-01 13:59:18
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masterfan359

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by lingonghua at 2015-08-31 12:18:25
y引物不太匹配或降解，我们实验室学生也遇到过类似情况，重新合成引物试试

的确会存在这样的情况，引物放久了导致PCR扩增失败
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14楼2015-09-01 16:30:11
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ufo29119690

金虫 (小有名气)
应该是后来提取的DNA质量不好  有降解 或者浓度低

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15楼2015-09-02 06:33:28
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327351493

铁杆木虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-05 23:01:58
重新换一批新的引物，酶等，用第一次P的条件进行，如果能P出来，可能就是这些物质降解了，如果没P出来，可能是模板出问题了

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16楼2015-09-02 07:43:13
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vivd娟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉是模板的问题，降解了
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17楼2015-09-02 10:53:30
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xiaoyanzi517

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-05 23:02:15
可从两个方面找原因：
1.DNA换试剂盒提取试试
2.引物从干粉或原液重新稀释，用新鲜的工作液做PCR
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偶时晴天偶时雨
18楼2015-09-02 12:51:10
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枭翔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-05 23:01:24
首先，看看你的模板DNA，跑个电泳看看，是不是降解。最好是重新提取一次。引物一般没啥问题，可以最后考虑。扩增体系里面加上5-10%的DMSO。可以用你第一次的产物作为模板进行扩增，这样万无一失，如果还是不行，说明你的酶可能失活了。
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19楼2015-09-02 13:44:41
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王栋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lingonghua at 2015-08-31 12:18:25
y引物不太匹配或降解，我们实验室学生也遇到过类似情况，重新合成引物试试

谢谢前辈~最近重新提了DNA,发现是因为之前提DNA没有除RNA的原因。但是PCR产物浓度不高，该怎么解决呢？谢谢前辈~

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20楼2015-09-03 22:41:27
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