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cherryfyx

新虫 (初入文坛)

[求助] 稀释涂布计数菌落的时候是怎么稀释混匀的? 已有3人参与

我之前做稀释涂布都很正常,可是最近涂布的平板总是不长菌,即使一个样品涂8个平行也都不长菌,很奇怪,期初怀疑是稀释用振荡器没有混匀。后来改用枪吹吸20次,可还是不行,真的不明白了,大家稀释混匀的到时候都是怎么混匀的啊
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琳dzljiayou

金虫 (小有名气)

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是不是稀释度没选对,或是样品中的菌是活的吗?先用样品检测一下菌是否是活的!
2楼2015-08-25 10:19:40
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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能够排除不是培养基以及细菌培养的问题么?比如菌量的多少,细菌的活性是否正常。浓度稀释过低也菌也不会生长,建议楼主做一个高一倍或者高两倍的涂布培养,甚至直接培养原菌液。振荡器或者用枪吹,一般能混均匀的,个人感觉不是这个问题。
3楼2015-08-25 12:25:23
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

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5楼2015-08-25 15:22:12
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smilingworld

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cherryfyx at 2015-08-31 10:44:15
嗯,我从斜面上直接划线到平板上长出菌了,后来又将原液稀释100—10-8然后涂布也都长了,说明培养基是没问题的,可是又做一次是先将原液稀释1、2、4、8、16倍然后再分别稀释100-10-8涂布,又出现了只有稀释8倍的原 ...

画线培养然后溶解到生理盐水中当作的原菌液么?楼主请先确认这种细菌在生理盐水中是否会存活,换成无菌蒸馏水试试。而且,楼主把原菌液稀释1,2,4,8,16倍后再做培养基涂布,只有稀释8倍的涂布后培养基上有菌,其余的都没有?8倍稀释原液后长出的菌落很多么,比如稀释倍数低的菌落数不清,稀释倍数高的有几十几百个?给楼主一些个人建议:1. 稀释细菌的时候换成无菌蒸馏水或者PBS试一试;2. 确定原菌液的浓度,就是测过OD后,涂布到培养基,看看CFU究竟有多少;3. 原菌液稀释1,2,4,16倍后的菌液,直接涂布到培养基上,不要做稀释,看看1,2,4,16倍稀释后的液体中,有没有菌。4. 个人认为不是振荡混匀的问题。一些菌假如放置在营养匮乏的液体中较长时间,菌的细胞会发生变化,会存活,但是不会分裂生长。假如不研究长时间放置细菌的代谢变化,最好使用新培养的。
9楼2015-08-31 13:11:07
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beach2015

新虫 (小有名气)

或者是你稀释液放久了,细菌沉下去了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-08-25 12:51:01
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cherryfyx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by beach2015 at 2015-08-25 12:51:01
或者是你稀释液放久了,细菌沉下去了

稀释完是会沉,不过我涂布前又用振荡器混匀了
6楼2015-08-31 10:37:11
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cherryfyx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by smilingworld at 2015-08-25 12:25:23
能够排除不是培养基以及细菌培养的问题么?比如菌量的多少,细菌的活性是否正常。浓度稀释过低也菌也不会生长,建议楼主做一个高一倍或者高两倍的涂布培养,甚至直接培养原菌液。振荡器或者用枪吹,一般能混均匀的, ...

嗯,我从斜面上直接划线到平板上长出菌了,后来又将原液稀释100—10-8然后涂布也都长了,说明培养基是没问题的,可是又做一次是先将原液稀释1、2、4、8、16倍然后再分别稀释100-10-8涂布,又出现了只有稀释8倍的原液长出菌了其他都没长的情况,现在最困惑的就是为什么有的长有的不长,而且就算是稀释不准的问题也不能那么多组都是一个菌落也没有吧
7楼2015-08-31 10:44:15
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cherryfyx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by -字仲康 at 2015-08-25 15:22:12
用枪混匀还是挺好的,梯度稀释刚好就用枪头进行混匀。你稀释了8个梯度都没有出现菌株,应该就不是稀释的问题了吧。
大肠的话稀释10-3,10-4,10-5,10-6这个范围内一般就会是有菌的。没有菌的,就是活性低了,发酵 ...

我用75%的生理盐水稀释的,活菌在生理盐水里存活的时间也很短吗
8楼2015-08-31 10:45:23
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blue198651

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cherryfyx at 2015-08-31 10:45:23
我用75%的生理盐水稀释的,活菌在生理盐水里存活的时间也很短吗...

75%?是笔误吗?为什么用这么高浓度的盐水?生理盐水不是0.85%吗?
10楼2015-09-01 07:48:59
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