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cherryfyx

新虫 (初入文坛)

[求助] 稀释涂布计数菌落的时候是怎么稀释混匀的? 已有3人参与

我之前做稀释涂布都很正常,可是最近涂布的平板总是不长菌,即使一个样品涂8个平行也都不长菌,很奇怪,期初怀疑是稀释用振荡器没有混匀。后来改用枪吹吸20次,可还是不行,真的不明白了,大家稀释混匀的到时候都是怎么混匀的啊
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smilingworld

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cherryfyx at 2015-08-31 10:44:15
嗯,我从斜面上直接划线到平板上长出菌了,后来又将原液稀释100—10-8然后涂布也都长了,说明培养基是没问题的,可是又做一次是先将原液稀释1、2、4、8、16倍然后再分别稀释100-10-8涂布,又出现了只有稀释8倍的原 ...

画线培养然后溶解到生理盐水中当作的原菌液么?楼主请先确认这种细菌在生理盐水中是否会存活,换成无菌蒸馏水试试。而且,楼主把原菌液稀释1,2,4,8,16倍后再做培养基涂布,只有稀释8倍的涂布后培养基上有菌,其余的都没有?8倍稀释原液后长出的菌落很多么,比如稀释倍数低的菌落数不清,稀释倍数高的有几十几百个?给楼主一些个人建议:1. 稀释细菌的时候换成无菌蒸馏水或者PBS试一试;2. 确定原菌液的浓度,就是测过OD后,涂布到培养基,看看CFU究竟有多少;3. 原菌液稀释1,2,4,16倍后的菌液,直接涂布到培养基上,不要做稀释,看看1,2,4,16倍稀释后的液体中,有没有菌。4. 个人认为不是振荡混匀的问题。一些菌假如放置在营养匮乏的液体中较长时间,菌的细胞会发生变化,会存活,但是不会分裂生长。假如不研究长时间放置细菌的代谢变化,最好使用新培养的。
9楼2015-08-31 13:11:07
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琳dzljiayou

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是稀释度没选对,或是样品中的菌是活的吗?先用样品检测一下菌是否是活的!
2楼2015-08-25 10:19:40
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smilingworld

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
能够排除不是培养基以及细菌培养的问题么?比如菌量的多少,细菌的活性是否正常。浓度稀释过低也菌也不会生长,建议楼主做一个高一倍或者高两倍的涂布培养,甚至直接培养原菌液。振荡器或者用枪吹,一般能混均匀的,个人感觉不是这个问题。
3楼2015-08-25 12:25:23
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beach2015

新虫 (小有名气)

或者是你稀释液放久了,细菌沉下去了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-08-25 12:51:01
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