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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用Tagman探针进行分型，请问对所提取的DNA的浓度有要求么？
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happyllong

新虫 (初入文坛)

[交流] 用Tagman探针进行分型，请问对所提取的DNA的浓度有要求么？ 已有2人参与

听师兄说好像是不能超过200ng/μl还是多少的？我想问这DNAde浓度不是越高越容易PCR，然后方便分型么？
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1楼 2015-08-20 22:40:27
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我是鱼豆腐

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:04:18
不是啊，我们都把DNA浓度稀释到10ng每微升左右的
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2楼2015-08-22 10:03:03
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happyllong

新虫 (初入文坛)
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2楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-22 10:03:03
不是啊，我们都把DNA浓度稀释到10ng每微升左右的

那你们是直接用缓冲液来稀释的么？还有你们用什么来检测浓度的，我们是用NANADROP微量紫外分光光度计来直接测的，感觉结果好不稳定啊，同一个样本几次的结果不太一样。
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3楼2015-08-22 22:24:09
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我是鱼豆腐

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3楼: Originally posted by happyllong at 2015-08-22 22:24:09
那你们是直接用缓冲液来稀释的么？还有你们用什么来检测浓度的，我们是用NANADROP微量紫外分光光度计来直接测的，感觉结果好不稳定啊，同一个样本几次的结果不太一样。...

额，我是用1XTE稀释的，检测跟你们用的一样的，但是我每个样检测前用手指轻弹一下，然后测三次同一个样，这样就比较准了

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4楼2015-08-22 22:34:52
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caoyuan2007

新虫 (初入文坛)
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Taqman探针对野生型和突变型进行分型，是有浓度比例的，如果其中一种浓度达到一定程度，会有扩增的。
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loveitwhenweshare
5楼2015-08-23 08:27:34
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happyllong

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4楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-22 22:34:52
额，我是用1XTE稀释的，检测跟你们用的一样的，但是我每个样检测前用手指轻弹一下，然后测三次同一个样，这样就比较准了
...

你TE是另外买的么？我试剂盒里只有TB，都说TE比TB保存DNA好，我不知道有没有换TE的必要。那你加TE稀释是直接往里面加所需的TE量就可以了么，加完不用再水浴了吧，因为DNA已经都溶解了。
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6楼2015-08-24 10:07:40
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happyllong

新虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-22 22:34:52
额，我是用1XTE稀释的，检测跟你们用的一样的，但是我每个样检测前用手指轻弹一下，然后测三次同一个样，这样就比较准了
...

我听师兄说浓度太低了不好保存，所以一般浓度不是很高就不稀释。不知道你们稀释到10ng微升的保存效果怎么样？
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7楼2015-08-24 10:11:35
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我是鱼豆腐

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6楼: Originally posted by happyllong at 2015-08-24 10:07:40
你TE是另外买的么？我试剂盒里只有TB，都说TE比TB保存DNA好，我不知道有没有换TE的必要。那你加TE稀释是直接往里面加所需的TE量就可以了么，加完不用再水浴了吧，因为DNA已经都溶解了。...

长期使用和保存还是用TE好些，我的TE都是我自己配的你敢信...不过灭菌了，我一般提出来DNA后统一每个都加50微升的TE，然后溶解后去测dna浓度，根据浓度大小最后再用灭菌水进行稀释成工作液（我一般样品都是几百ng每微升，所以我一般稀释就是吸10微升dna，再加100微升灭菌水，这样就基本都在10~100ng每微升以内了）。
   加完TE还是要溶解的，70度5min很快的，我用的是金属浴，总之溶解了就行了。
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8楼2015-08-24 13:39:01
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我是鱼豆腐

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7楼: Originally posted by happyllong at 2015-08-24 10:11:35
我听师兄说浓度太低了不好保存，所以一般浓度不是很高就不稀释。不知道你们稀释到10ng微升的保存效果怎么样？...

原样你可以放在-20度冰箱里，但是你该用的时候还是要用啊，所以我就用我准备好的稀释液，而且我感觉10~100ng每微升的样用一个月应该没问题的。
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9楼2015-08-24 13:42:22
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happyllong

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8楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-24 13:39:01
长期使用和保存还是用TE好些，我的TE都是我自己配的你敢信...不过灭菌了，我一般提出来DNA后统一每个都加50微升的TE，然后溶解后去测dna浓度，根据浓度大小最后再用灭菌水进行稀释成工作液（我一般样品都是几百ng每 ...

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10楼2015-08-25 12:02:46
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