北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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happyllong

新虫 (初入文坛)

[交流] 用Tagman探针进行分型,请问对所提取的DNA的浓度有要求么? 已有2人参与

听师兄说好像是不能超过200ng/μl还是多少的?我想问这DNAde浓度不是越高越容易PCR,然后方便分型么?
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-08-22 23:04:18
不是啊,我们都把DNA浓度稀释到10ng每微升左右的
2楼2015-08-22 10:03:03
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happyllong

新虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-22 10:03:03
不是啊,我们都把DNA浓度稀释到10ng每微升左右的

那你们是直接用缓冲液来稀释的么?还有你们用什么来检测浓度的,我们是用NANADROP微量紫外分光光度计来直接测的,感觉结果好不稳定啊,同一个样本几次的结果不太一样。
3楼2015-08-22 22:24:09
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)


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3楼: Originally posted by happyllong at 2015-08-22 22:24:09
那你们是直接用缓冲液来稀释的么?还有你们用什么来检测浓度的,我们是用NANADROP微量紫外分光光度计来直接测的,感觉结果好不稳定啊,同一个样本几次的结果不太一样。...

额,我是用1XTE稀释的,检测跟你们用的一样的,但是我每个样检测前用手指轻弹一下,然后测三次同一个样,这样就比较准了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-08-22 22:34:52
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caoyuan2007

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Taqman探针对野生型和突变型进行分型,是有浓度比例的,如果其中一种浓度达到一定程度,会有扩增的。
loveitwhenweshare
5楼2015-08-23 08:27:34
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happyllong

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-22 22:34:52
额,我是用1XTE稀释的,检测跟你们用的一样的,但是我每个样检测前用手指轻弹一下,然后测三次同一个样,这样就比较准了
...

你TE是另外买的么?我试剂盒里只有TB,都说TE比TB保存DNA好,我不知道有没有换TE的必要。那你加TE稀释是直接往里面加所需的TE量就可以了么,加完不用再水浴了吧,因为DNA已经都溶解了。
6楼2015-08-24 10:07:40
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happyllong

新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-22 22:34:52
额,我是用1XTE稀释的,检测跟你们用的一样的,但是我每个样检测前用手指轻弹一下,然后测三次同一个样,这样就比较准了
...

我听师兄说浓度太低了不好保存,所以一般浓度不是很高就不稀释。不知道你们稀释到10ng微升的保存效果怎么样?
7楼2015-08-24 10:11:35
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)


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6楼: Originally posted by happyllong at 2015-08-24 10:07:40
你TE是另外买的么?我试剂盒里只有TB,都说TE比TB保存DNA好,我不知道有没有换TE的必要。那你加TE稀释是直接往里面加所需的TE量就可以了么,加完不用再水浴了吧,因为DNA已经都溶解了。...

长期使用和保存还是用TE好些,我的TE都是我自己配的你敢信...不过灭菌了,我一般提出来DNA后统一每个都加50微升的TE,然后溶解后去测dna浓度,根据浓度大小最后再用灭菌水进行稀释成工作液(我一般样品都是几百ng每微升,所以我一般稀释就是吸10微升dna,再加100微升灭菌水,这样就基本都在10~100ng每微升以内了)。
   加完TE还是要溶解的,70度5min很快的,我用的是金属浴,总之溶解了就行了。
8楼2015-08-24 13:39:01
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我是鱼豆腐

金虫 (小有名气)


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7楼: Originally posted by happyllong at 2015-08-24 10:11:35
我听师兄说浓度太低了不好保存,所以一般浓度不是很高就不稀释。不知道你们稀释到10ng微升的保存效果怎么样?...

原样你可以放在-20度冰箱里,但是你该用的时候还是要用啊,所以我就用我准备好的稀释液,而且我感觉10~100ng每微升的样用一个月应该没问题的。
9楼2015-08-24 13:42:22
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happyllong

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by 我是鱼豆腐 at 2015-08-24 13:39:01
长期使用和保存还是用TE好些,我的TE都是我自己配的你敢信...不过灭菌了,我一般提出来DNA后统一每个都加50微升的TE,然后溶解后去测dna浓度,根据浓度大小最后再用灭菌水进行稀释成工作液(我一般样品都是几百ng每 ...

谢谢你的回复
10楼2015-08-25 12:02:46
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