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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求蛋白表达大侠指点
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小糖精

铜虫 (小有名气)

[求助] 求蛋白表达大侠指点 已有4人参与

我做蛋白表达，共有两条带，一条是目的条带，大约21KD左右，另一条要比目的条带粗很多，大约60KD左右，我不知道是不是形成了三聚体，想请教一下有什么方法可以鉴别一下？望各位大侠指点！这两条带是挂了Ni柱纯化下来的。
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1楼 2015-08-17 10:52:18
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小糖精

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-18 11:08:03
可以加0.5-1mM DTT,或者5-10mM β-ME打开下看看不就知道了么，注意蛋白表达纯化实验时的PH要大于7效果才明显，上NI柱前一定要把游离的NI冲干净。
如果还聚，就需要控制浓度了，一般来说，浓度对聚合影响很大。...

加DTT那个是怎么做呀  因为我做的实验他有效果，我觉着是三聚体也没事  ，就是关键我想知道那是不是三聚体还是杂蛋白
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7楼2015-08-22 10:38:32
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:42
你的三聚体会带组氨酸吗？如果聚合后会有，你可以用还原SDS再做一下，如果有条带打开，SDS会有反应的。
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2楼2015-08-17 15:43:59
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苏先森

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:49
Loading buffer分别用还原和非还原，看是否有区别。如果没有区别，应该是杂带；如果60kd条带没了或减弱，应该是聚体。ps）二聚体比较常见，另外最好上图，方便查看。
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Number 7
3楼2015-08-17 15:58:27
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:53
可以加0.5-1mM DTT,或者5-10mM β-ME打开下看看不就知道了么，注意蛋白表达纯化实验时的PH要大于7效果才明显，上NI柱前一定要把游离的NI冲干净。
如果还聚，就需要控制浓度了，一般来说，浓度对聚合影响很大。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-08-18 11:08:03
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