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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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小糖精

铜虫 (小有名气)

[求助] 求蛋白表达大侠指点 已有4人参与

我做蛋白表达,共有两条带,一条是目的条带,大约21KD左右,另一条要比目的条带粗很多,大约60KD左右,我不知道是不是形成了三聚体,想请教一下有什么方法可以鉴别一下?望各位大侠指点!这两条带是挂了Ni柱纯化下来的。
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:53
可以加0.5-1mM DTT,或者5-10mM β-ME打开下看看不就知道了么,注意蛋白表达纯化实验时的PH要大于7效果才明显,上NI柱前一定要把游离的NI冲干净。
如果还聚,就需要控制浓度了,一般来说,浓度对聚合影响很大。
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
4楼2015-08-18 11:08:03
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:42
你的三聚体会带组氨酸吗?如果聚合后会有,你可以用还原SDS再做一下,如果有条带打开,SDS会有反应的。
2楼2015-08-17 15:43:59
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苏先森

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:49
Loading buffer分别用还原和非还原,看是否有区别。如果没有区别,应该是杂带;如果60kd条带没了或减弱,应该是聚体。ps)二聚体比较常见,另外最好上图,方便查看。
Number 7
3楼2015-08-17 15:58:27
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80140333

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:58
你换瓶新的巯基乙醇   在跑胶就没有了
5楼2015-08-19 11:11:19
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