应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求蛋白表达大侠指点
91/1返回列表
查看: 1179  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小糖精

铜虫 (小有名气)

[求助] 求蛋白表达大侠指点 已有4人参与

我做蛋白表达，共有两条带，一条是目的条带，大约21KD左右，另一条要比目的条带粗很多，大约60KD左右，我不知道是不是形成了三聚体，想请教一下有什么方法可以鉴别一下？望各位大侠指点！这两条带是挂了Ni柱纯化下来的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-08-17 10:52:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:42
你的三聚体会带组氨酸吗？如果聚合后会有，你可以用还原SDS再做一下，如果有条带打开，SDS会有反应的。
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-17 15:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苏先森

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:49
Loading buffer分别用还原和非还原，看是否有区别。如果没有区别，应该是杂带；如果60kd条带没了或减弱，应该是聚体。ps）二聚体比较常见，另外最好上图，方便查看。
赞一下 回复此楼
Number 7
3楼2015-08-17 15:58:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:53
可以加0.5-1mM DTT,或者5-10mM β-ME打开下看看不就知道了么，注意蛋白表达纯化实验时的PH要大于7效果才明显，上NI柱前一定要把游离的NI冲干净。
如果还聚，就需要控制浓度了，一般来说，浓度对聚合影响很大。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
4楼2015-08-18 11:08:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

80140333

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小糖精: 金币+5 2015-08-22 10:40:58
你换瓶新的巯基乙醇   在跑胶就没有了
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-19 11:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小糖精

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2015-08-17 15:43:59
你的三聚体会带组氨酸吗？如果聚合后会有，你可以用还原SDS再做一下，如果有条带打开，SDS会有反应的。

我做了WB  三聚体地方没带 但是问了其他人说形成三聚体之后组氨酸标记有可能因为构想的改变不在外面了
赞一下 回复此楼
6楼2015-08-22 10:36:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小糖精

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-18 11:08:03
可以加0.5-1mM DTT,或者5-10mM β-ME打开下看看不就知道了么，注意蛋白表达纯化实验时的PH要大于7效果才明显，上NI柱前一定要把游离的NI冲干净。
如果还聚，就需要控制浓度了，一般来说，浓度对聚合影响很大。...

加DTT那个是怎么做呀  因为我做的实验他有效果，我觉着是三聚体也没事  ，就是关键我想知道那是不是三聚体还是杂蛋白
赞一下 回复此楼
7楼2015-08-22 10:38:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小糖精

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 80140333 at 2015-08-19 11:11:19
你换瓶新的巯基乙醇   在跑胶就没有了

巯基乙醇是直接加到样品里面然后煮样再跑胶么
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-22 10:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小糖精 at 2015-08-22 10:36:45
我做了WB  三聚体地方没带 但是问了其他人说形成三聚体之后组氨酸标记有可能因为构想的改变不在外面了...

那估计你这60KD的不是三聚体。应该是别的东西。
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-01 13:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小糖精 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +8 医学老男孩 2026-08-13 19/950 2026-08-13 20:15 by yq199112088
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +9 家与远方 2026-08-10 14/700 2026-08-13 09:41 by 臭臭不臭01
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭