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细菌素

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌素离子层析挂柱 已有1人参与

请教大家,我在做细菌素(戊糖片球菌,硫酸铵沉淀透析,冻干,用bufferA复溶上样,静置孵育1h)的离子层析,用的是阳离子,填料是SP Sepharose Flow Fast,最先用的缓冲液:bufferA是pH6.8 20mM的PB,bufferB是pH6.8 20mM的PB+1M NaCl,但是在用bufferA洗脱时出现了一个很高的峰,后面都没有峰。后面将缓冲液的pH分别调至6.3、5.8、5.3(浓度均为20mM),情况一样,又调整缓冲液浓度,分别为10mM、2mM(pH均为6.8),情况还是一样,不知道怎么会这样。
后面又看了文献,直接用上清液做了一次(担心会不会是硫酸铵没除干净),用10mM冰醋酸平衡,bufferA是pH6.8 20mM的PB,bufferB是0.1M NaCl,1M NaCl,做出来还是不理想。[img][/img](上清液做的图片,ps:因为资源有限,所以手动做的)
请教大家,万分感谢!


新人,第一次发帖,有什么不对的,多多原谅
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

初步分析,你层析过程中,目标产物基本没有和层析凝胶结合,三种可能,1.你柱子没平衡好,层析介质买到后,装柱后是要经过处理,里面的贮存液洗掉,然后用你上样的缓冲液平衡。
2.测下你透析后的电导,看透析的是否彻底,或者建议你直接用葡聚糖G-25脱盐后在离子交换层析,若透析处理的不到位,上样离子强度太大,很难和层析介质结合。
3.确定你的目标产品在你上样的PH范围带的是正电荷么?若不确定建议试试阴离子交换填料,DEAE Bio-sep FF.
祝实验顺利,希望多交流,谢谢
2楼2015-08-18 16:39:45
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110147加油

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-08-18 16:39:45
初步分析,你层析过程中,目标产物基本没有和层析凝胶结合,三种可能,1.你柱子没平衡好,层析介质买到后,装柱后是要经过处理,里面的贮存液洗掉,然后用你上样的缓冲液平衡。
2.测下你透析后的电导,看透析的是否 ...

请问怎么知道我的细菌素需要阳离子交换填料还是阴离子呢?
3楼2015-11-19 11:00:49
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