24小时热门版块排行榜    

查看: 460  |  回复: 2

细菌素

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌素离子层析挂柱 已有1人参与

请教大家,我在做细菌素(戊糖片球菌,硫酸铵沉淀透析,冻干,用bufferA复溶上样,静置孵育1h)的离子层析,用的是阳离子,填料是SP Sepharose Flow Fast,最先用的缓冲液:bufferA是pH6.8 20mM的PB,bufferB是pH6.8 20mM的PB+1M NaCl,但是在用bufferA洗脱时出现了一个很高的峰,后面都没有峰。后面将缓冲液的pH分别调至6.3、5.8、5.3(浓度均为20mM),情况一样,又调整缓冲液浓度,分别为10mM、2mM(pH均为6.8),情况还是一样,不知道怎么会这样。
后面又看了文献,直接用上清液做了一次(担心会不会是硫酸铵没除干净),用10mM冰醋酸平衡,bufferA是pH6.8 20mM的PB,bufferB是0.1M NaCl,1M NaCl,做出来还是不理想。[img][/img](上清液做的图片,ps:因为资源有限,所以手动做的)
请教大家,万分感谢!


新人,第一次发帖,有什么不对的,多多原谅
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈:小木虫仅提供交流平台,不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布,如果其内容涉及到知识产权问题,其责任在于用户本人,如对版权有异议,请联系邮箱:xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 8.12上清液层析.xls
  • 2015-08-13 09:27:19, 11.5 K

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

初步分析,你层析过程中,目标产物基本没有和层析凝胶结合,三种可能,1.你柱子没平衡好,层析介质买到后,装柱后是要经过处理,里面的贮存液洗掉,然后用你上样的缓冲液平衡。
2.测下你透析后的电导,看透析的是否彻底,或者建议你直接用葡聚糖G-25脱盐后在离子交换层析,若透析处理的不到位,上样离子强度太大,很难和层析介质结合。
3.确定你的目标产品在你上样的PH范围带的是正电荷么?若不确定建议试试阴离子交换填料,DEAE Bio-sep FF.
祝实验顺利,希望多交流,谢谢
2楼2015-08-18 16:39:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

110147加油

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-08-18 16:39:45
初步分析,你层析过程中,目标产物基本没有和层析凝胶结合,三种可能,1.你柱子没平衡好,层析介质买到后,装柱后是要经过处理,里面的贮存液洗掉,然后用你上样的缓冲液平衡。
2.测下你透析后的电导,看透析的是否 ...

请问怎么知道我的细菌素需要阳离子交换填料还是阴离子呢?
3楼2015-11-19 11:00:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 细菌素 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见