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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 细菌素离子层析挂柱
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细菌素

新虫 (初入文坛)

[求助] 细菌素离子层析挂柱 已有1人参与

请教大家，我在做细菌素（戊糖片球菌，硫酸铵沉淀透析，冻干，用bufferA复溶上样，静置孵育1h）的离子层析，用的是阳离子，填料是SP Sepharose Flow Fast，最先用的缓冲液:bufferA是pH6.8 20mM的PB，bufferB是pH6.8 20mM的PB+1M NaCl,但是在用bufferA洗脱时出现了一个很高的峰，后面都没有峰。后面将缓冲液的pH分别调至6.3、5.8、5.3（浓度均为20mM），情况一样，又调整缓冲液浓度，分别为10mM、2mM（pH均为6.8），情况还是一样，不知道怎么会这样。
后面又看了文献，直接用上清液做了一次（担心会不会是硫酸铵没除干净），用10mM冰醋酸平衡，bufferA是pH6.8 20mM的PB，bufferB是0.1M NaCl，1M NaCl，做出来还是不理想。[img][/img]（上清液做的图片，ps：因为资源有限，所以手动做的）
请教大家，万分感谢！


新人，第一次发帖，有什么不对的，多多原谅
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  • 附件 1 : 8.12上清液层析.xls
    • 2015-08-13 09:27:19, 11.5 K

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1楼 2015-08-13 09:29:09
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110147加油

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-08-18 16:39:45
初步分析，你层析过程中，目标产物基本没有和层析凝胶结合，三种可能，1.你柱子没平衡好，层析介质买到后，装柱后是要经过处理，里面的贮存液洗掉，然后用你上样的缓冲液平衡。
2.测下你透析后的电导，看透析的是否 ...

请问怎么知道我的细菌素需要阳离子交换填料还是阴离子呢？
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3楼2015-11-19 11:00:49
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

初步分析，你层析过程中，目标产物基本没有和层析凝胶结合，三种可能，1.你柱子没平衡好，层析介质买到后，装柱后是要经过处理，里面的贮存液洗掉，然后用你上样的缓冲液平衡。
2.测下你透析后的电导，看透析的是否彻底，或者建议你直接用葡聚糖G-25脱盐后在离子交换层析，若透析处理的不到位，上样离子强度太大，很难和层析介质结合。
3.确定你的目标产品在你上样的PH范围带的是正电荷么？若不确定建议试试阴离子交换填料，DEAE Bio-sep FF.
祝实验顺利，希望多交流，谢谢
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2楼2015-08-18 16:39:45
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