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Dane磊叔

新虫 (初入文坛)

[交流] 定点突变问题,做的很不顺啊,希望哪位大神指点一下 已有5人参与

求助,想请问做基因的定点突变,引物如何设计,有什么原则吗?比如说是C变成A,G变成T?,是不是得到的产物只要在预测网站上显示,不再出现对应的转录因子结合位点就可以啊。。。最近做的很不顺,总是出现其他的突变,并且得到的产物比目的序列长几十bp,真是太头疼了。。。希望各位大神能帮助我分析分析啊,拜托!
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siriusxuan

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
出现其他突变找酶的原因,引物设计跟你的实验方法有关,overlapPCR还是DPn酶切或者拓扑异构酶重组,所用引物都有区别。
此座可言轻社稷,江山万里起风尘。
4楼2015-08-03 17:29:21
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
安捷伦网站上直接有点突变引物设计的小软件

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
2楼2015-08-03 08:25:52
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love犬夜叉

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是做定点突变的,突变位点的引物我是在线设计的http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi,这个网址应该能帮助你,而且也很容易设计,还有一对引物就用之前扩增目的基因全长的那对引物就好了,用重叠延伸PCR做定点突变较为快捷,而且PCR过程中要用高保真酶防止上下游片段尾部加A,我用的是TAKARA的pfu酶,挺好用的。
justloveinuyasha
3楼2015-08-03 11:19:06
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chenleihefei

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by love犬夜叉 at 2015-08-03 11:19:06
我也是做定点突变的,突变位点的引物我是在线设计的http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi,这个网址应该能帮助你,而且也很容易设计,还有一对引物就用之前扩增目的基因全长的那对引物就好了, ...

你好,能说一下你们突变pcr的眼里吗?
我就是我!
5楼2015-09-17 14:45:25
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