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定点突变问题，做的很不顺啊，希望哪位大神指点一下 已有5人参与
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| 求助，想请问做基因的定点突变，引物如何设计，有什么原则吗？比如说是C变成A，G变成T？，是不是得到的产物只要在预测网站上显示，不再出现对应的转录因子结合位点就可以啊。。。最近做的很不顺，总是出现其他的突变，并且得到的产物比目的序列长几十bp，真是太头疼了。。。希望各位大神能帮助我分析分析啊，拜托！ |
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随风飘摇11
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2楼2015-08-03 08:25:52
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| 我也是做定点突变的，突变位点的引物我是在线设计的http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi，这个网址应该能帮助你，而且也很容易设计，还有一对引物就用之前扩增目的基因全长的那对引物就好了，用重叠延伸PCR做定点突变较为快捷，而且PCR过程中要用高保真酶防止上下游片段尾部加A，我用的是TAKARA的pfu酶，挺好用的。 |
3楼2015-08-03 11:19:06
siriusxuan
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5楼2015-09-17 14:45:25
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恩 刚好我们就是做点突变的 我来说几句 我们设计引物的原则 是保守，就是三个碱基如果变其中一个就可以达到突变效果我们就选择变一个 ，然后突变位点前18个后12个 一般是三十个碱基 你说的特异性不好或者多P了一段 我们也会遇到 试着多做几次或者换台机器试试 或者换高保真酶 希望对你有帮助 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2015-09-17 17:09:16