| 查看: 1882 | 回复: 5 | |||
[交流]
定点突变问题，做的很不顺啊，希望哪位大神指点一下 已有5人参与
|
| 求助，想请问做基因的定点突变，引物如何设计，有什么原则吗？比如说是C变成A，G变成T？，是不是得到的产物只要在预测网站上显示，不再出现对应的转录因子结合位点就可以啊。。。最近做的很不顺，总是出现其他的突变，并且得到的产物比目的序列长几十bp，真是太头疼了。。。希望各位大神能帮助我分析分析啊，拜托！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有135人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
随风飘摇11
木虫 (著名写手)
- 应助: 92 (初中生)
- 金币: 2284.9
- 散金: 606
- 红花: 53
- 帖子: 2249
- 在线: 818.5小时
- 虫号: 1146270
- 注册: 2010-11-14
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2015-08-03 08:25:52
love犬夜叉
木虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1526.6
- 散金: 200
- 红花: 1
- 帖子: 85
- 在线: 27.2小时
- 虫号: 2838266
- 注册: 2013-11-30
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
| 我也是做定点突变的，突变位点的引物我是在线设计的http://www.bioinformatics.org/primerx/cgi-bin/DNA_1.cgi，这个网址应该能帮助你，而且也很容易设计，还有一对引物就用之前扩增目的基因全长的那对引物就好了，用重叠延伸PCR做定点突变较为快捷，而且PCR过程中要用高保真酶防止上下游片段尾部加A，我用的是TAKARA的pfu酶，挺好用的。 |
3楼2015-08-03 11:19:06
siriusxuan
木虫 (正式写手)
- 应助: 50 (小学生)
- 金币: 1830
- 散金: 207
- 红花: 7
- 帖子: 509
- 在线: 151.5小时
- 虫号: 1992629
- 注册: 2012-09-11
- 专业: 生物化学
4楼2015-08-03 17:29:21
chenleihefei
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 72.5
- 散金: 10
- 帖子: 69
- 在线: 17.1小时
- 虫号: 2160013
- 注册: 2012-12-01
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
5楼2015-09-17 14:45:25
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
恩 刚好我们就是做点突变的 我来说几句 我们设计引物的原则 是保守，就是三个碱基如果变其中一个就可以达到突变效果我们就选择变一个 ，然后突变位点前18个后12个 一般是三十个碱基 你说的特异性不好或者多P了一段 我们也会遇到 试着多做几次或者换台机器试试 或者换高保真酶 希望对你有帮助 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2015-09-17 17:09:16
