8楼: Originally posted by 小小技术官 at 2015-07-30 05:16:43
甘氨酸14.4g tris 3.03g 甲醇150ml  定容到1升
恒压100  电流330mA左右  20分钟
PVDF膜选择孔径0.22微米的
我敢说这种条件如果做不出来  那就是做不出来了

9楼: Originally posted by 天际雾影 at 2015-07-30 09:32:47
首先，26KD 蛋白不小了，你可以跑12%的胶，用低分子量的MARKER；其次，你的细胞数也太少了吧。转膜时你可以先用marker做个实验，放两块膜试一下正常时间转膜会不会把蛋白转到第二块膜上。你说的电流不稳有可能是你的 ...

4楼: Originally posted by lavender_li at 2015-07-29 16:06:41
200-300个细胞？这么点细胞才能提出来多少蛋白质啊。为什么不多养一点

7楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-30 04:22:21
完全可以，相同数目细胞具有可比性，但是你细胞数太低，而且你怎么数的200个细胞？细胞计数板单位是*10的4次方，当然你可以数完后用体积确定200个细胞，但是你为什么不多上，真是太少了，这么少的细胞即使做出结果 ...

2楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-29 02:24:01
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出 ...

6楼: Originally posted by 1510050322 at 2015-07-29 21:35:27
我之前做的某种蛋白分子量是在12附近，转膜时间为2-2.5h,从来没有出现转过的情况。

13楼: Originally posted by 史密斯丹妮 at 2015-07-31 07:15:24
我养的是卵母细胞，首先样本来就少，其次它不能传代，所以也没办法...

12楼: Originally posted by 史密斯丹妮 at 2015-07-31 07:11:42
放两块膜是个好方法！我想问一下，转完膜后，染了胶观察有没有转上去，结果胶上的maker基本上没了，甚至滤纸上都有，但是在目的条带那块儿的条带在胶上还能很明显的看到，这怎么分析呢？是怎么回事？...