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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 小蛋白WB 已有5人参与

请求帮助：我的蛋白26KD，需要从200-300个细胞的细胞膜上提取获得，用的是总蛋白提取方法，之前用过专门膜蛋白提取试剂盒，提不出来。有人通过提取总蛋白的方法最后出现结果，但是我总是没有结果。因为细胞量少，蛋白浓度低，蛋白又小，所以希望提供总蛋白的提取改进方法，或者说浓缩方法。再者，转膜时间抓握不好，因为电流不稳定。请问大约这么大的蛋白转多长时间？另外，因为它小很容易转过，所以能不能再转膜时放两次膜？！谢谢！望及时给予帮助
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1楼 2015-07-28 21:18:04
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小小技术官 at 2015-07-30 05:16:43
甘氨酸14.4g tris 3.03g 甲醇150ml  定容到1升
恒压100  电流330mA左右  20分钟
PVDF膜选择孔径0.22微米的
我敢说这种条件如果做不出来  那就是做不出来了

首先非常感谢您的帮助与建议！我们的转膜液是买的半干法转膜液粉状后稀释的。我们的机器一般恒压是25v，电流一般从0.5A开始上，可以上到大约1A，是短时间转膜仪。有时电流不上，总在0.5A左右徘徊，我觉得这跟滤纸的湿度等都有关。时间有时很难把握，有的人23大小的蛋白电流上不到一，11分钟就可转成功。
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11楼2015-07-31 07:02:47
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出来不如再加大上样量，40ug试试。至于你怀疑WB的过程，上个预染marker不就好了
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2楼2015-07-29 02:24:01
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-29 02:24:01
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出 ...

有相关操作，比如两个样都取两百个细胞提蛋白，最后上20ul体积的样跑胶，因为细胞数量可知，取得个数又相等，提取的操作过程也基本没误差，所以同上20ul样就相当于上样量相等了，所以也一直没做上样前的BCA定量。
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3楼2015-07-29 15:52:45
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
200-300个细胞？这么点细胞才能提出来多少蛋白质啊。为什么不多养一点
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4楼2015-07-29 16:06:41
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