应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 小蛋白WB
52/1返回列表
查看: 2140  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 小蛋白WB 已有5人参与

请求帮助：我的蛋白26KD，需要从200-300个细胞的细胞膜上提取获得，用的是总蛋白提取方法，之前用过专门膜蛋白提取试剂盒，提不出来。有人通过提取总蛋白的方法最后出现结果，但是我总是没有结果。因为细胞量少，蛋白浓度低，蛋白又小，所以希望提供总蛋白的提取改进方法，或者说浓缩方法。再者，转膜时间抓握不好，因为电流不稳定。请问大约这么大的蛋白转多长时间？另外，因为它小很容易转过，所以能不能再转膜时放两次膜？！谢谢！望及时给予帮助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2015-07-28 21:18:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by 史密斯丹妮 at 2015-07-31 07:15:24
我养的是卵母细胞，首先样本来就少，其次它不能传代，所以也没办法...

26kDa的蛋白质一般的电泳加转膜应该就可以看到。
但是200-300 个细胞实在太少了，提取出来的蛋白质量少，整个实验结果的误差感觉会很大。
另外蛋白少，电泳的时候上样的量也少，就算转膜接抗体什么全都非常完美，也有可能因为样品太少而检测不到你要的条带。
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2015-07-31 11:15:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出来不如再加大上样量，40ug试试。至于你怀疑WB的过程，上个预染marker不就好了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-07-29 02:24:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-29 02:24:01
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出 ...

有相关操作，比如两个样都取两百个细胞提蛋白，最后上20ul体积的样跑胶，因为细胞数量可知，取得个数又相等，提取的操作过程也基本没误差，所以同上20ul样就相当于上样量相等了，所以也一直没做上样前的BCA定量。
赞一下 回复此楼
3楼2015-07-29 15:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
200-300个细胞？这么点细胞才能提出来多少蛋白质啊。为什么不多养一点
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-07-29 16:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 6/300 2026-11-15 02:59 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-15 00:27 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-14 22:04 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:13 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 10/500 2026-11-13 11:08 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 9/450 2026-11-13 11:02 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 TgvkbZZl9tqB 2026-11-11 4/200 2026-11-12 12:51 by ECLTXnJnRSXf
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:20 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:11 by HajghKOMynmz
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 8/400 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:38 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:27 by HajghKOMynmz
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 FChKX8meu1ds 2026-11-09 12/600 2026-11-12 09:43 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 gRND4NVAZ8VG 2026-11-11 3/150 2026-11-12 07:42 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 6/300 2026-11-12 07:09 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-12 06:03 by 9fOTqj074tIg
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 9/450 2026-11-12 05:19 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭