24小时热门版块排行榜    

查看: 1977  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 小蛋白WB 已有5人参与

请求帮助:我的蛋白26KD,需要从200-300个细胞的细胞膜上提取获得,用的是总蛋白提取方法,之前用过专门膜蛋白提取试剂盒,提不出来。有人通过提取总蛋白的方法最后出现结果,但是我总是没有结果。因为细胞量少,蛋白浓度低,蛋白又小,所以希望提供总蛋白的提取改进方法,或者说浓缩方法。再者,转膜时间抓握不好,因为电流不稳定。请问大约这么大的蛋白转多长时间?另外,因为它小很容易转过,所以能不能再转膜时放两次膜?!谢谢!望及时给予帮助
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 史密斯丹妮 at 2015-07-29 15:52:45
有相关操作,比如两个样都取两百个细胞提蛋白,最后上20ul体积的样跑胶,因为细胞数量可知,取得个数又相等,提取的操作过程也基本没误差,所以同上20ul样就相当于上样量相等了,所以也一直没做上样前的BCA定量。...

完全可以,相同数目细胞具有可比性,但是你细胞数太低,而且你怎么数的200个细胞?细胞计数板单位是*10的4次方,当然你可以数完后用体积确定200个细胞,但是你为什么不多上,真是太少了,这么少的细胞即使做出结果也不具有统计性,建议至少2万,何必不做个梯度呢
7楼2015-07-30 04:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不要闹,你的蛋白可不是小蛋白,26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少,200-300细胞真的是在玩呢,你上样之前用BCA定量,每个lane至少在10ug才有可能检测出来,当然跟这种蛋白的表达量有关了,如果一直没做出来不如再加大上样量,40ug试试。至于你怀疑WB的过程,上个预染marker不就好了
2楼2015-07-29 02:24:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-29 02:24:01
不要闹,你的蛋白可不是小蛋白,26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少,200-300细胞真的是在玩呢,你上样之前用BCA定量,每个lane至少在10ug才有可能检测出来,当然跟这种蛋白的表达量有关了,如果一直没做出 ...

有相关操作,比如两个样都取两百个细胞提蛋白,最后上20ul体积的样跑胶,因为细胞数量可知,取得个数又相等,提取的操作过程也基本没误差,所以同上20ul样就相当于上样量相等了,所以也一直没做上样前的BCA定量。
3楼2015-07-29 15:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
200-300个细胞?这么点细胞才能提出来多少蛋白质啊。为什么不多养一点
4楼2015-07-29 16:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:40 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 00:28 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
请填处理意见