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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 小蛋白WB 已有5人参与

请求帮助:我的蛋白26KD,需要从200-300个细胞的细胞膜上提取获得,用的是总蛋白提取方法,之前用过专门膜蛋白提取试剂盒,提不出来。有人通过提取总蛋白的方法最后出现结果,但是我总是没有结果。因为细胞量少,蛋白浓度低,蛋白又小,所以希望提供总蛋白的提取改进方法,或者说浓缩方法。再者,转膜时间抓握不好,因为电流不稳定。请问大约这么大的蛋白转多长时间?另外,因为它小很容易转过,所以能不能再转膜时放两次膜?!谢谢!望及时给予帮助
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1510050322

银虫 (初入文坛)

我之前做的某种蛋白分子量是在12附近,转膜时间为2-2.5h,从来没有出现转过的情况。
6楼2015-07-29 21:35:27
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不要闹,你的蛋白可不是小蛋白,26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少,200-300细胞真的是在玩呢,你上样之前用BCA定量,每个lane至少在10ug才有可能检测出来,当然跟这种蛋白的表达量有关了,如果一直没做出来不如再加大上样量,40ug试试。至于你怀疑WB的过程,上个预染marker不就好了
2楼2015-07-29 02:24:01
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-29 02:24:01
不要闹,你的蛋白可不是小蛋白,26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少,200-300细胞真的是在玩呢,你上样之前用BCA定量,每个lane至少在10ug才有可能检测出来,当然跟这种蛋白的表达量有关了,如果一直没做出 ...

有相关操作,比如两个样都取两百个细胞提蛋白,最后上20ul体积的样跑胶,因为细胞数量可知,取得个数又相等,提取的操作过程也基本没误差,所以同上20ul样就相当于上样量相等了,所以也一直没做上样前的BCA定量。
3楼2015-07-29 15:52:45
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
200-300个细胞?这么点细胞才能提出来多少蛋白质啊。为什么不多养一点
4楼2015-07-29 16:06:41
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