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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)

[求助] 小蛋白WB 已有5人参与

请求帮助：我的蛋白26KD，需要从200-300个细胞的细胞膜上提取获得，用的是总蛋白提取方法，之前用过专门膜蛋白提取试剂盒，提不出来。有人通过提取总蛋白的方法最后出现结果，但是我总是没有结果。因为细胞量少，蛋白浓度低，蛋白又小，所以希望提供总蛋白的提取改进方法，或者说浓缩方法。再者，转膜时间抓握不好，因为电流不稳定。请问大约这么大的蛋白转多长时间？另外，因为它小很容易转过，所以能不能再转膜时放两次膜？！谢谢！望及时给予帮助
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1楼 2015-07-28 21:18:04
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天际雾影

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 史密斯丹妮 at 2015-07-31 07:11:42
放两块膜是个好方法！我想问一下，转完膜后，染了胶观察有没有转上去，结果胶上的maker基本上没了，甚至滤纸上都有，但是在目的条带那块儿的条带在胶上还能很明显的看到，这怎么分析呢？是怎么回事？...

有可能是蛋白量太多了，M过去了你的蛋白肯定也过去了。只是太多的话就没有完全过去。但如果你是用抗体纯化的话，那条你以为是你自己的带很有可能是IgG的轻链，大小24KD。你得先用普通SDS-PAGE检测一下总蛋白里在26KD处对比对照看有没有你的条带。一般纯化的蛋白很难用考染看到的。
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19楼2015-07-31 22:19:22
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huiting410

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出来不如再加大上样量，40ug试试。至于你怀疑WB的过程，上个预染marker不就好了
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2楼2015-07-29 02:24:01
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史密斯丹妮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huiting410 at 2015-07-29 02:24:01
不要闹，你的蛋白可不是小蛋白，26k是非常容易把握的。主要原因是细胞量太少，200-300细胞真的是在玩呢，你上样之前用BCA定量，每个lane至少在10ug才有可能检测出来，当然跟这种蛋白的表达量有关了，如果一直没做出 ...

有相关操作，比如两个样都取两百个细胞提蛋白，最后上20ul体积的样跑胶，因为细胞数量可知，取得个数又相等，提取的操作过程也基本没误差，所以同上20ul样就相当于上样量相等了，所以也一直没做上样前的BCA定量。
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3楼2015-07-29 15:52:45
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
200-300个细胞？这么点细胞才能提出来多少蛋白质啊。为什么不多养一点
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4楼2015-07-29 16:06:41
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