应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物无法完全测序
111/2返回列表12下一页
查看: 1841  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小小雨儿飞

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物无法完全测序 已有2人参与

PCR产物无法完全测序，我的序列是137bp,测序得到109bp，什么情况啊？初入分子生物学，不太懂，求指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
遇见未知的自己
1楼 2015-07-27 19:50:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

表弟爱网游

金虫 (小有名气)
片段太短，测序最开始的几十个碱基会很不准确（引物区序列不准），所以你得到的结果会跟你期望的片段长度有一点差别。建议你连一个载体之后再测序，这样准确率会高很多。只要你的PCR样品长度大于400bp，只要浓度够，直接测序问题不大的。小于200bp，最好连载体，用通用引物测序。
赞一下(3人) 回复此楼
当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
8楼2015-07-29 11:37:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neon_alone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小小雨儿飞: 金币+3 2015-07-28 16:51:57
你是直接测序PCR产物的吗？如果是的话，你自己的引物作为测序引物，前面是测不到，建议连接到T载体测序一下。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-07-28 16:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小雨儿飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by neon_alone at 2015-07-28 16:41:41
你是直接测序PCR产物的吗？如果是的话，你自己的引物作为测序引物，前面是测不到，建议连接到T载体测序一下。

哦哦，这样啊，好的。是不是所有都测序如果要测完整都要T载体连接？
赞一下(1人) 回复此楼
遇见未知的自己
5楼2015-07-28 16:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
连接测序比较准啊

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-07-28 21:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-28 22:56:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小小雨儿飞 at 2015-07-28 16:51:53
哦哦，这样啊，好的。是不是所有都测序如果要测完整都要T载体连接？...

你也可以选择双向测序，这样就不用连载体了。如果只是想知道序列，建议双向测序，把你的上下游引物都给测序公司。如果后续要做功能验证分析，那还是连载体再测，反正后面也要做这步。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2015-07-28 22:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小小雨儿飞: 金币+2 2015-07-28 16:50:35
是连到载体上测的吗？
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-28 14:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小雨儿飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-28 14:52:20
是连到载体上测的吗？

是PCR产物切胶回收后送测的
赞一下 回复此楼
遇见未知的自己
4楼2015-07-28 16:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigvally

新虫 (初入文坛)
连T或者有测序引物的表达载体后测序
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-29 17:19:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

见神一笑

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 表弟爱网游 at 2015-07-29 11:37:18
片段太短，测序最开始的几十个碱基会很不准确（引物区序列不准），所以你得到的结果会跟你期望的片段长度有一点差别。建议你连一个载体之后再测序，这样准确率会高很多。只要你的PCR样品长度大于400bp，只要浓度够， ...

正解

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
好好努力
10楼2015-07-29 17:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小小雨儿飞 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] FileCode能看出啥？ +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] 帮忙看看fileCode +3 wwncly 2026-08-10 5/250 2026-08-10 19:06 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +3 瞬息宇宙 2026-08-10 3/150 2026-08-10 18:27 by Tide man
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭