应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物无法完全测序
111/2返回列表12下一页
查看: 2007  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小小雨儿飞

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物无法完全测序 已有2人参与

PCR产物无法完全测序，我的序列是137bp,测序得到109bp，什么情况啊？初入分子生物学，不太懂，求指点
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
遇见未知的自己
1楼 2015-07-27 19:50:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

表弟爱网游

金虫 (小有名气)
片段太短，测序最开始的几十个碱基会很不准确（引物区序列不准），所以你得到的结果会跟你期望的片段长度有一点差别。建议你连一个载体之后再测序，这样准确率会高很多。只要你的PCR样品长度大于400bp，只要浓度够，直接测序问题不大的。小于200bp，最好连载体，用通用引物测序。
赞一下(3人) 回复此楼
当一切如飞舞的落叶坠落，惋惜之余，也要学会原谅与释怀
8楼2015-07-29 11:37:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neon_alone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小小雨儿飞: 金币+3 2015-07-28 16:51:57
你是直接测序PCR产物的吗？如果是的话，你自己的引物作为测序引物，前面是测不到，建议连接到T载体测序一下。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-07-28 16:41:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小雨儿飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by neon_alone at 2015-07-28 16:41:41
你是直接测序PCR产物的吗？如果是的话，你自己的引物作为测序引物，前面是测不到，建议连接到T载体测序一下。

哦哦，这样啊，好的。是不是所有都测序如果要测完整都要T载体连接？
赞一下(1人) 回复此楼
遇见未知的自己
5楼2015-07-28 16:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BBMC-2012

木虫 (知名作家)
连接测序比较准啊

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2015-07-28 21:46:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-07-28 22:56:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小小雨儿飞 at 2015-07-28 16:51:53
哦哦，这样啊，好的。是不是所有都测序如果要测完整都要T载体连接？...

你也可以选择双向测序，这样就不用连载体了。如果只是想知道序列，建议双向测序，把你的上下游引物都给测序公司。如果后续要做功能验证分析，那还是连载体再测，反正后面也要做这步。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2015-07-28 22:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小小雨儿飞: 金币+2 2015-07-28 16:50:35
是连到载体上测的吗？
赞一下 回复此楼
2楼2015-07-28 14:52:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小雨儿飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2015-07-28 14:52:20
是连到载体上测的吗？

是PCR产物切胶回收后送测的
赞一下 回复此楼
遇见未知的自己
4楼2015-07-28 16:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigvally

新虫 (初入文坛)
连T或者有测序引物的表达载体后测序
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-29 17:19:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

见神一笑

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 表弟爱网游 at 2015-07-29 11:37:18
片段太短，测序最开始的几十个碱基会很不准确（引物区序列不准），所以你得到的结果会跟你期望的片段长度有一点差别。建议你连一个载体之后再测序，这样准确率会高很多。只要你的PCR样品长度大于400bp，只要浓度够， ...

正解

[ 发自小木虫客户端 ]
回复此楼
好好努力
10楼2015-07-29 17:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小小雨儿飞 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 06:43 by l48hFd8Nwae2
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 12/600 2026-11-09 06:32 by l48hFd8Nwae2
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 11/550 2026-11-09 00:26 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭