应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » DNA凝胶电泳
52/1返回列表
查看: 2936  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

午夜魔兰

银虫 (正式写手)

[交流] DNA凝胶电泳

小弟用的是变性聚丙烯酰胺凝胶分离小于50个碱基的单链DNA，丙烯酰胺浓度20%， 100V电压，跑2-3h。发现DNA条带非常弱，基本看不出碱基，但是marker非常清晰（Low MW DNA Marker，25, 50, 75, 100, 150, 200, 300, 400, 500 bp）。
请问：1，上样的DNA的浓度是多少？开始用60nM没有做条带来，后来用大浓度，大约300nM，还是没有条带，非常弱。
2，需要1500V预电泳吗，我没有进行这一步。
3，我做的实验条件有没有什么问题？
4，50个单链的DNA跑出的条带是对应于marker的25bp还是50bp？ 完全互补配对的双链DNA，每条链都是50个碱基，跑出的条带对应的是50bp还是100bp，谢谢！
DNA凝胶电泳
1.jpg
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小泓杨

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-25 11:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by 午夜魔兰 at 2015-07-27 14:13:38
4.2g尿素，2ml TBE，3ml水，5ml 40%丙烯酰胺，再就是90uL 10% aps和8ul TEMED...

那就是7M尿素，浓度没有什么问题，不过最好后加水补到10ml，直接加3ml水总体积会超过去。那你注意一下上样前变性，再确定一下样品没有降解，应该问题不大。如果实在染不出来，可以考虑化学标记(生物素或者地高辛)或者同位素(磷32)标记，太短的单链DNA有时候就是不好染，你可以把marker也变性一下再跑。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
15楼2015-07-27 19:18:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

小泓杨

捐助贵宾 (初入文坛)

初出茅庐
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:58:15
午夜魔兰: 金币+3 2015-07-25 20:36:48
预电泳很容易忘。但是，有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质，如介质为PAG时，还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒，但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的，估计时间为一小时。
赞一下 回复此楼
中国的-boy 是一个缺心眼子！
2楼2015-07-25 19:06:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2015-07-25 20:02:09
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

午夜魔兰

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小泓杨 at 2015-07-25 19:06:05
预电泳很容易忘。但是，有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质，如介质为PAG时，还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒，但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的，估计时间为 ...

电压多少？
回复此楼
4楼2015-07-25 20:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 02:21 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭