应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » DNA凝胶电泳
171/2返回列表12下一页
查看: 2734  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

午夜魔兰

银虫 (正式写手)

[交流] DNA凝胶电泳

小弟用的是变性聚丙烯酰胺凝胶分离小于50个碱基的单链DNA，丙烯酰胺浓度20%， 100V电压，跑2-3h。发现DNA条带非常弱，基本看不出碱基，但是marker非常清晰（Low MW DNA Marker，25, 50, 75, 100, 150, 200, 300, 400, 500 bp）。
请问：1，上样的DNA的浓度是多少？开始用60nM没有做条带来，后来用大浓度，大约300nM，还是没有条带，非常弱。
2，需要1500V预电泳吗，我没有进行这一步。
3，我做的实验条件有没有什么问题？
4，50个单链的DNA跑出的条带是对应于marker的25bp还是50bp？ 完全互补配对的双链DNA，每条链都是50个碱基，跑出的条带对应的是50bp还是100bp，谢谢！
DNA凝胶电泳
1.jpg
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小泓杨

» 猜你喜欢
1楼 2015-07-25 11:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

穆远life

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
午夜魔兰: 金币+1 2015-07-27 09:21:49
两个碱基一个BP，一个碱基对一BP.单连50碱基应该是25bp的marker，双链的50个碱基对，50bpmarker。做细致点，点marker都会弄到胶齿上，太粗糙了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2015-07-26 10:12:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

小泓杨

捐助贵宾 (初入文坛)

初出茅庐
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
送红花一朵
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-07-25 19:58:15
午夜魔兰: 金币+3 2015-07-25 20:36:48
预电泳很容易忘。但是，有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质，如介质为PAG时，还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒，但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的，估计时间为一小时。
赞一下 回复此楼
中国的-boy 是一个缺心眼子！
2楼2015-07-25 19:06:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
3楼2015-07-25 20:02:09
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

午夜魔兰

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小泓杨 at 2015-07-25 19:06:05
预电泳很容易忘。但是，有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质，如介质为PAG时，还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒，但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的，估计时间为 ...

电压多少？
回复此楼
4楼2015-07-25 20:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

午夜魔兰

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小泓杨 at 2015-07-25 19:06:05
预电泳很容易忘。但是，有些事是真理的事就必须做。预电泳的目的就是除去介质中的杂质，如介质为PAG时，还可以清除凝胶中的丙烯酰胺。丙烯酰胺有剧毒，但是聚丙烯酰胺却没有毒。预电泳是设计在加样前的，估计时间为 ...

仅仅是因为没有预电压才出现上述现象吗？为什么marker没影响？
其他步骤有没有影响
赞一下 回复此楼
5楼2015-07-25 20:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lhs8625
祝福祝福祝福祝福祝福
6楼2015-07-25 20:52:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小泓杨

捐助贵宾 (初入文坛)

初出茅庐
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
午夜魔兰: 金币+2 2015-07-27 09:21:58
我原先做的时候也是批不出来。但是marker还在那里，它比较抗造，就是它最容易留下印记。电压一般范围就可以，你原先用什么电压，就用什么电压，稍微调调也可以，这个没有讲究。
赞一下 回复此楼
中国的-boy 是一个缺心眼子！
7楼2015-07-26 08:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 穆远life at 2015-07-26 10:12:19
两个碱基一个BP，一个碱基对一BP.单连50碱基应该是25bp的marker，双链的50个碱基对，50bpmarker。做细致点，点marker都会弄到胶齿上，太粗糙了。

你跑过单链DNA吗，尤其是短单链DNA,迁移率和EB染色效率都取决于序列，我手上的63nt引物刚好在50bp marker的位置，而50nt引物介于25bp与50bp之间，更接50bp。如果是随机序列会形成多条带或者smear。短单链DNA染色效率很低，一般要100ng才能看到清晰的带，同聚物几乎染不上。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2015-07-27 10:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxzk

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
尿素浓度多少？上样前最好做一下变性，另外上样量不是看浓度，是看总量，我一般上100ng，更多也可以，染色效率也跟序列有关系。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
10楼2015-07-27 10:06:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 午夜魔兰 的主题更新
171/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 07化学280分求调剂 +6 722865 2026-03-23 6/300 2026-03-24 20:58 by allen-yin
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +15 吃吃吃才有意义 2026-03-19 16/800 2026-03-24 19:51 by 了了了了。。
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +9 材料学257求调剂 2026-03-23 10/500 2026-03-24 07:36 by wangy0907
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 材料与化工085600，总分304，本科有两篇sci参与，求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭